慢性脑缺血大鼠认知障碍与脑甲状腺激素代谢关系研究

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1、硕士学位论文慢性脑缺血大鼠认知障碍与脑甲状腺激素代谢关系研究硕士研究生：刘海云指导教师：陆兵勋教授王群副教授摘要．研究背景血管性痴呆(VD)是老年期痴呆的主要类型之一。在我国，其患病率仅次于Mzheimer病，缺血性病变尤其多发性脑梗塞是VD的主要病理基础，VD可由于主要脑动脉闭塞引起脑梗死，梗死脑组织容积超过80—150ml(包括多发性脑梗塞)临床即可出现痴呆，额叶、颞叶及边缘系统等部位血管源性病变更易导致痴呆。资料显示60岁以上缺血性卒中患者3个月后痴呆发生率较正常人群增高9倍。腔隙性脑梗死患者有83％出现认知和行为功能减退，相对一般人群中

2、认知功能障碍的发生率为5．3％，增加了15．7倍。另外，国内外已有大量实验证实，慢性脑缺血会引起实验动物的学习记忆等行为学及海马病理等改变：双侧颈总动脉结扎术后30d，海马锥体细胞密度减低，术后60d，核固缩深染，海马锥体细胞密度显著减低。双侧颈总动脉结扎大鼠存活30d时，经水迷宫测试出现明显的学习记忆障碍；60d后，学习记忆能力仍然降低，没有恢复的趋势。另有研究显示颈动脉狭窄造成的脑血流慢性失代偿或脑结构损害可引起认知障碍，对严重颈动脉狭窄患者行颈动脉内膜剥脱术后，其认知功能有所恢复。VD的发病机制一直在不断的探索中。多项研究证明成年个体需要

3、中、高水平的循环甲状腺激素水平来维持其最佳脑功能状态。在正常成年人血清中L浓度是L浓度的近50倍，而脑中T3浓度却与T4浓度基本相平。同样老年人的脑比外周组织需要更多的T4以完成其代谢。有学者研究正常甲状腺功能的老年病人其认知中文摘要功能变化与甲状腺激素水平的关系，发现血清低T4水平者认知功能下降的可能性为相对高T。水平者的双倍；老年甲状腺功能减退患者往往伴有认知功能障碍，用外源性甲状腺激素替代治疗后，其甲状腺功能及认知功能均得到改善。最近一项研究证实亚临床甲减患者经甲状腺激素替代治疗后其韦氏记忆量表测评分值有明显增高；成年甲减时大鼠海马LTP

4、产生不能，以及大鼠和人学习和记忆损害。进一步研究发现TH通过对NRl和NR2BmRNA表达的调节影响LTP的产生，进而影响认知功能；可以认为认知功能障碍的发生与甲状腺激素代谢紊乱有一定联系。测定脑梗塞患者脑脊液TH发现：CSFFT。、FT。均显著下降，临床研究发现VD患者存在血清甲状腺激素水平异常，主要表现为低T3综合征，且其变化与痴呆程度密切相关。本实验通过永久性结扎双侧颈总动脉建立大鼠慢性脑供血不足模型，研究慢性脑缺血大鼠脑组织甲状腺激素代谢变化特点，为系统性研究慢性脑缺血大鼠认知功能改变与甲状腺激素系统变化的关系提供实验支持，为临床VD的

5、治疗提供新的思路。研究方法第一部分慢性脑缺血大鼠认知功能行为钡4试一．实验分组：37只雄性成年sD大鼠随机分四组：假手术组：单纯手术组(永久性结扎双侧颈总动脉5周)；术后给药组(SR侧颈总动脉结扎后次日给予甲状腺素20mg／日／只灌胃共5周)；甲状腺机能减低组(含O．15％PTU的低碘饲料喂养8周)。二．MorriS水迷宫测试：各组均于实验终点进行定位航行试验、空间探索试验及工作记忆测试。三．统计方法：实验数据以均值±标准误表示，采用SPSSl0．0统计软件中的随机方差分析(one—wayANOVA)进行统计学分析，比较各组之间相关测试指标差异

6、。第二部分慢性脑缺血大鼠脑组织甲状腺激素代谢变化一．实验分组：假手术组8只，单纯手术组6只，术后给药组6只，甲减II硕士学位论文组8只。二．放射免疫法测定脑组织T3、T4、rT。1．脑匀浆的制备：于实验终点大鼠断头取脑，除去表面脑膜及血管，称重，按1：2比例与PB混合，冰水浴中剪碎，于预冷的匀浆器中5分种内制成组织匀浆。2．脑组织T，、T4、rT3的提取及纯化：取0．4G脑组织匀浆按比例加入95％乙醇，振摇，4℃静置，离心取上清，室温下经AmberliteCG-400层析柱，通过醋酸盐缓冲液的PH梯度、醋酸的浓度梯度，与乙醇的交互作用净化提纯脑

7、组织中的T3、T。、rT。。3．放射免疫法测定脑组织T。、T。、rT。：按照试剂盒说明操作；以”5I多探头Y计数器分别测各管放射性计数，并进行数据处理。三．放射免疫法测定脑组织T4-5’-脱碘酶活性脑组织匀浆离心取上清，分为测试管与对照管各400uL，各加入磷酸盐缓冲液50011L，前者加入L—T4并放入37℃恒温箱120分钟充分作用，后者为放入恒温箱作用后再加入L—T；，95％乙醇2ml中止反应，离心取上清，放射免疫法分别测定T3。并按公式：T。一5’-脱碘酶活性=(测试管T。量nmol／1一对照管T。量nmol／])X3×650．97X0．

8、769，计算脱碘酶活性。(3为测试管和对照管容积3ml，650．97为T。分子量，0．769为I／O．13×5×2，其中0．13为组织量(g-eq)，