差异显示法分离黑腹果蝇体色图式相关基因

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1、附件三：湖北大学学位论文原创性声明和使用授权说明原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品或成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律后果由本人承担。论文作者签名：卅≯丧懒谳年}月，钿学位论文使用授权说明本人完全了解湖北大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与

2、阅览服务：学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文；在不以赢利为目的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。(保密论文在解密后遵守此规定)论文作者签名：M砂毒签名日期：如口}年5胄J}同聊躲嘞书签名日期：泖6年6月，，日摘要黑腹果蝇(DJ删池me肠Hp卵5柳)作为遗传学研究的经典模式生物，其新突变体不断被发现、记录和研究。在黑腹果蝇突变体中包括很多体色表型发生变化的品系，近年来国内外在该领域的探索日益加快。本实验室黑腹果蝇的自发突变品系黑条体(blackstreak，BSR)体色呈现复杂的性状，由原来的背甲黑色(

3、比已知黑檀体突变型略浅)分化为深黑、褐色和浅黄色。各体色品系虽然历经十余代的纯化，后代中除了出现深黑外，仍然有褐色和浅黄色的出现。为了探讨出现该复杂性状的分子机制，本研究采用差异显示反转录PCR(DDRT_PCR)技术比较黑条体突变体(BSR)与野生型黑腹果蝇(wildtype，wT)的基因差异表达，共得到6个差异表达片段。经RT-PcR验证，发现一长为215bp的阳性片段RTcY04在黑条体突变体(BSR)中的表达水平明显低于在野生型黑腹果蝇(wT)中的表达。将获得的RTcY04片段采用单引物PcR扩增技术，设计了三对引物进

4、行PcR扩增，逐段测序，将重叠序列拼接。分别得到了844bp的WTR1℃Y04片段，804bp的BSRRTCY04片段，后者比前者缺失了40bp。通过BlastII检索发现，以上拼接序列的部分序列与一未知功能的基因CG31007的序列重叠，而BSR中缺失的40bp片段位于基因cG31007mRNA3’端。由于盯CY04片段的序列与未知功能基因CG31007重叠，因此通过对基因CG31007的功能进行预测，可以初步分析阳性差异RTCY04片段的功能。本研究采用生物信息学工具搜索到基因cG31007的蛋白质序列中具有一个典型的一c

5、HcH结构域(fcojledcoil1】-【heli】【1】·【coiledcoil2卜【helix2】domain)，预测与细胞色素C氧化酶的功能有关，基因命名为C0曙壤。另外还具有以下基序：3个蛋白激酶c磷酸化位点，2个cAMP．蛋白激酶磷酸化位点，3个酪蛋白激酶2磷酸化位点，5个N-端酰基化位点，1个天冬酰胺糖基化位点。其中，酪蛋白激酶2磷酸化位点与基因的转录表达或调控有关，糖基化、酰基化和磷酸化与蛋白质合成后的修饰与加工有关。由此推测：阳性差异基因COFR在BSRmRNA低水平表达以及3，端的缺失，影响了对应蛋白质(细

6、胞色素c氧化酶功能相关)的表达，这可能间接影响了儿茶酚胺代谢，导致色素代谢的差异，从而使两者出现了明显差异的色素图式。关于果蝇体色图式与基因c0匦尺之间的关系还需要进⋯步的研究。关键词：黑腹果蝇；体色图式；差异显示反转录PCR；．CHCH结构域细胞色素C氧化酶AbstractDm如p^f缸研P肠以Dg口鼬盯isacl踮sicmodelorganismjngenetics．MofeandmoremutantshavebeeⅡfoundandstudjed．ThereseaTchofthemutationsrelatedtobOd

7、ycolorhasbeendeVelopeddeeplyaUoVertheworld．T1leblackstreal【mutant(BSR)isspontaneousmutationstraingettingfromthewildtypeofD．小e肠，lDg四s把，删DfoIt置leabno丌IlalbIackpigInentintlleCellandGeneticslaboratoryofHubeiUⅡiversjty．Inrecentyears，tllemutantstfaindemoⅡstratedcomplexVar

8、iantbodycolorincludingd盯kblack，brownandfawnthougIlaftermofethall10geⅡ皇rations’jsolation．Toscttlethcmoleculafmechanismofcomplcxmutationchar