赤芝中麦角甾醇酯色谱分离和检测方法地研究

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1、摘要甾醇类化合物，特别是真菌的标志化合物麦角甾醇及其酯，作为真菌细胞膜的重要组成成分及其与真菌生物量之间的相关性，已引起人们的广泛关注；同时，因麦角甾醇酯在真菌中的多样性，使其有望成为真菌化学分类的标志化合物之一。因此，建立一种能快速、准确、高效的分离纯化麦角甾醇酯，并对其酯链脂肪酸的组成进行定性和定量分析的方法显得十分重要。本文以赤芝为例，采用薄层色谱和柱色谱方法，分离并纯化出目标化合物麦角甾醇酯；而后比较了不同催化方式的衍生化处理效果，确定了最适宜的衍生化方式；最后采用气相色谱．质谱(GC．MS)和气相色谱-同位素比值质谱(oc．raMS)对赤芝中麦角甾醇酯和三酰甘油的酯键脂肪酸化

2、学和稳定碳同位素组成进行了测定，获得了如下创新性认识：l、本文建立了一种准确、快速分离纯化真菌中麦角甾醇酯，并对其酯键脂肪酸组成进行定性和定量测定的方法；该新方法适用于研究真菌中麦角甾醇酯的化学组成，并可为真菌的化学分类提供强有力的分析技术支撑。此方法的实验步骤和条件为：将赤芝子实体菌管部分切碎、干燥，碾碎约60目和120目粉末；以二氯甲烷：甲醇(8：1)为溶剂，用索氏法连续抽提72h；将提取物中的石油醚可溶部分用20％-"氯甲烷+80％石油醚作初始洗脱液，分离麦角甾醇酯和三酰甘油；在麦角甾醇酯中加入甲苯助溶，再加入1％硫酸甲醇溶液，于800C下加热回流5h；取石油醚层进行GC．MS和

3、GC—IRMS分析。2、作者从赤芝的麦角甾醇酯中识别出16种酯键脂肪酸，其中棕榈酸(C16：o)含量最高(56．42％)，其次为油酸(C18：1A9e)(19．80％)和亚油酸(C18：2A9c,12c)(4．42％)；从赤芝的．T．三酰甘油中识别出15种酯键脂肪酸，其中油酸(C18：lA9‘；)含量最多(61．26％)，棕榈酸(15．81％)和亚油酸(C1813．69％)次之；在麦角甾醇酯的酯键脂肪酸中，以饱和脂肪酸为主(Zsat=73．61％)，而在三酰甘油酯的键脂肪酸中，以不饱和脂肪酸为主(Zunsat=77．71％)。赤芝中麦角甾醇酯的含量为0．45mc／g．3、赤芝子实体全粉

4、的613C值为一23．8‰—一23．6‰，指示其培养基为C3植物；赤芝中麦角甾醇酯和三酰甘油的主要酯键脂肪酸内部分别存在如下稳定碳同位素分馏规律：Cls：o=C18：l△9。>C16：o≈LCl8：2A9c,12c及C18：o>C16：o=C18：l△9。=C⋯．A9c，12c；而麦角甾醇酯与三酰甘油中对应的主要酯键脂肪酸C16：o、C18：o和C18：2A9。，12。之间613C值明显不同，但它们C18：1△9。的613C值基本一致。关键词：色谱方法，麦角甾醇酯，赤芝ChromatographicMethodsfortheSeparationandDeterminationofErg

5、osterolEstersinGanodermalucidumMajor：BiotechnologySubmittedbyZHANGYahSupervisor：Prof．WANGJianghaiAbstractSteroidcompounds，inparticularergosterolsandtheirestersasfungalbiomarkers，whicharetheimportantcompositionofcellmembraneandrelatedtofungalbiomass，haveattractedagreatattention．Moreover，ergosrero

6、lesterisexpectedtobeoneofthebiomarkersforthechemicalchemotaxonomyoffungiduetoitsdiversity．Thus，itisquitesignificanttoestablisharapid，efficientandaccuratemethodtoseparateandpunfyergosterolesters，anddeterminethecompositionoffattyacidslinkedwithergoster01．TheauthorfocusedonGanodermalucidumasacasest

7、udy，firstlytodevelopamethodtoseparateandpurifythetargetcompoundergosterolesterviathin—layerchromatographyandcolumnchromatography,-thentochooseanappropriatetransesterification’methodviathecomparisonofdifferentcatalystmethods，