膀胱尿路上皮癌中survivin与其剪接变异体survivin2b和survivin△ex3的表达与其意义

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1、中文摘要表达。目前，国内外研究发现survivin基因在膀胱肿瘤的发生发展中具有重要作用，指出survivin敏感性及特异性较高，可以作为膀胱癌诊断和预后判断的的标志物。随着对其深入研究，发现其存在多种剪接变异体，其中survivin．2B和survivin-AEx3因其功能和作用的独特而受到重视。Survivin-2B在survivin的基础上增加了69bp的外显子2B，编码产生165个氨基酸外显子2B的插入干扰BIR结构域，使survivin-2B的抗凋亡活性明显下降。survivin-AEx3被选择剪切掉外显子3，并引起外显子4区域编码顺序的改变，终止密码子后移至3’端非翻

2、译区，编码137个氨基酸，产生增强的抗凋亡活性。目前一些研究表明，survivin．2B和survivin．AEx3在肿瘤的发展中显示了不同的作用。在软组织肉瘤及胃癌中可检测到survivin及其剪接变异体survivin-2B和survivin．AEx3存在。在脑部肿瘤中survivin，survivin-AEx3的表达高于良性对照组，survivin．AEx3在恶性脑肿瘤中高表达，而survivin一2B在良性组织中高表达。然而迄今为止关于膀胱尿路上皮癌中survivin剪接变异体的表达的研究较少。膀胱尿路上皮癌是我国泌尿系最常见的恶性肿瘤，浅表性膀胱癌的治疗方法主要为经尿道

3、肿瘤电切术，术后辅助化疗药物膀胱灌注。治疗后复发率可高达61％，大部分还会出现分级、分期的进展或者发生转移，从而丧失根治手术的机会。目前认为导致膀胱肿瘤术后较高复发率因素有：(1)膀胱癌病理类型是影响其局部复发的主要因素，特别是盆腔复发的危险性与肿瘤的病理类型直接相关；(2)膀胱肿瘤局部复发与原发肿瘤的分期、分级也有相关性，并按顺序依次递增；(3)显露困难操作受限致切除范围不够深，而引起切缘癌组织残留导致癌术后复发；(4)术后不能进行正规的膀胱灌注及定期随访。故对预后的判断、随访观察尤其重要。目前膀胱癌的诊断和随访观察主要依赖于膀胱镜检查及病理学活检，通过膀胱镜检查可以发现膀胱是

4、否出现肿瘤，可以明确肿瘤的数目、肿瘤大小、形态及发生部位。并且可以对肿瘤或可疑病变部位进行活组织病理学检查以明确诊断。但其为有创性检查，存在导致患者痛苦、漏诊早期病变、并发症多等缺点。因此寻找敏感性、特异性高的膀胱癌生物标志物，将会对疾病预后判断，复发与否有指导意义；同时也可作为肿瘤靶向治疗的新靶点。本研Ⅱ硕士学位论文究着重对膀胱尿路上皮癌中survivin及其剪接变异体survivin-2B和survivin-AEx3的表达进行研究，分析其表达与临床病理资料的相关性。研究方法(1)材料2007年12月至2009年6月我院泌尿外科手术切除的标本，膀胱尿路上皮癌标本55例(包括初发

5、及复发)，经病理证实，术前未予化疗和放疗。男性45例，女性10例，年龄30一87岁，中位年龄62．9岁。据WHO2004病理分级：低级别25例，高级别30例；TNM临床分期系统分组：Ta-TI36例，砭一T419例。取肉眼正常癌旁组织lO例，同期前列腺增生患者正常膀胱组织lO例作对照组。取组织无菌生理盐水冲洗，取大小约0．2era3放入EP管中立即置于．80"C冰箱保存，其余送病理检查。Survivin兔抗人单克隆抗体(齐康生物)、SP免疫组化试剂盒(博士德)，Trizol试剂、RT-PCR试剂盒、PCR所用引物及探针(达安公司)，ABI3900台式高通量DNA合成仪，科大创新H

6、C．3018R高速冷冻离心机，ABI9700PCR仪，ABI7500全自动荧光定量PCR仪。(2)RT-PCR法测定组织中Survivin，survivin-2B和survivin-AEx3表达取适量组织至新的1．5mlEP管中，用玻璃棒研磨，加入Trizollml，充分振荡混匀，加入氯仿0．2ml，盖紧盖子，用力摇动15s，15．30℃孵育2-3min，4"C12000r／min离心15min，取上清液至新的1．5mLEP管，总RNA提取按照Trizol说明书进行，选择13-actin作为内参基因，GenBank上查找基因mRNA序列，Primerexpress2．0软件设计引

7、物如下：5'-TCCACTGCCCCACTGAGAAC．3’和5'-CCTTCCAGCTCCn’GAAGCA．3’扩增Survivin(67bp)；5'-GCGGATCACGAGAGAGGAAC．3’和5’一AGmCAAAAATrCACCAAGGGTTA．3’扩增survivin．2B(102bp)；5’．AGlHTCAAAAp江TCACCAAGGGlvrA．3’和5'-GAATTTGAGGAAACTGCGGAGA．3’扩增survivin—AEx3(119bp)；5'-GCAT