survivin与其异构体survivin

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1、Survivin与其异构体Survivin【关键词】膀胱癌Survivin；Survivin-2B异构体实时定量RT-PCRExpressionandclinicalsignificanceonsurvivinanditsisomersurvivin-2Binbladdercancer［Abstract］ObjectiveToinvestigatetheexpressionofsurvivinmRNAanditsisomersurvivin-2BmRNAinbladdercanceranddiscussitspotentialclinicalsign

2、ificance.MethodsReal-timequantitiveRT-PCRRNA，survivin-2BmRNAin56casesofbladdermalignanttumortissuesand12casesofbladdernonmalignanttumortissues.ResultsMicrocrystallineexpressionsofsurvivinandsurvivin-2Balignanttumortissuesrespectively.Survivinandsurvivin-2Bexpressionsalignanttum

3、ortissues.Expressionofsurviviner;real-timequantitiveRT-PCRSurvivin是凋亡抑制蛋白家族IAPs（inhibitorofapoptosisproteins）中结构最简单，抗凋亡作用最强的蛋白分子，含有四个外显子和三个内含子，只含有一个杆状病毒IAP重复序列（baculoviralIAPrepeats，BIRs），BIR结构主要起抗凋亡作用。Mahotka等在1999年鉴定出Survivin的一种异构体Survivin-2B，Survivin-2B添加了被隐含外显子2B编码的23个氨基酸，该

4、外显子插入到Survivin的BIR区（外显子2和3之间）改变其三级结构及抗凋亡活性，在转染实验中发现Survivin-2B有明显降低抗凋亡的特性，并具有细胞毒性［1，2］。本研究通过运用实时定量PCR法检测膀胱癌组织中SurvivinmRNA及Survivin-2BmRNA的表达，并做定量分析，探讨它们在膀胱肿瘤发生、发展中的作用及临床意义。1对象与方法1.1研究对象选取2006年6月～2007年9月手术切除的原发性膀胱癌患者新鲜标本56例，男36例，女20例，年龄46～82岁，平均64岁。取同期膀胱非恶性肿瘤患者的膀胱病变组织标本12例（慢性膀胱

5、炎6例，腺性膀胱炎3例，内翻乳头状瘤3例）作为对照。标本均具有完整的病理资料。按MLV1.5μl，Rnasin0.5μl（Promega公司），dNTP0.5μl，H2O14.5μl，37℃1h，95℃5min，最后冷却至4℃，保存于-20℃备用。1.3实时定量RT-PCR反应以abl为内参，并设立空白对照。经内参均一化处理后，计算Survivin及Survivin-2BmRNA的相对表达量2-△Ct值。Survivin的上游引物：5′-TGCCTGGCAGCCCTTTC-3′，下游引物：5′-GCGCAGCCCTCCAAGAA-3′，survivi

6、n-2B［3］的上游引物：5′-GCACGGTGGCTTACGCCTG-3′下游引物：5’-AACCGGACGAATGCTTTTTATGTTCC-3′，TaqMan探针序列：5′-FAM-CAAGGACCACCGCATCTCTACATT-CAAGA-TAMRA-3′。abl内参的上游引物：5′-TCCTCCAGCTGTTATCTGGAAGA-3′，下游引物：5′-ACTCAGACCCTGAGGCTCAAAG-3′，探针序列：5′-FAM-AAGCCCTTCAGCGGCCAGTAGCAT-TAMRA-3′。反应条件：95℃5min预变性，95℃15s，

7、58℃25s，72℃25s，78℃0.1s，60℃～96℃0.3s融解曲线，72℃5min，共50个循环。实验重复3次。1.4PCR产物纯化及测序向膀胱肿瘤标本的Survivin-2BPCR产物中加入20mlDP洗脱液，37℃放置2min，离心回收DNA。将纯化后的DNA送至上海博亚公司进行测序。1.5统计学方法Survivin、Survivin-2B相对于内参abl表达量2-△Ct值以均数±标准差（x±s）表示，独立组间均数比较用Wilcoxon秩和检验，试验组内部组间采用Kruskal-an秩相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。数据由SPS

8、S11.5软件包完成。　　2结果2.1试验组与对照组Survivin，Survivin-2B的表达量对照组中