副粘病毒天津株hn、m基因克隆与表达的研究

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1、天津医科大学硕士学位论文缩写∞qNAmylosergsmBSADABDEPCEDTAELISAhPⅣHNHRPmTGIgGLBMMBPMcAb英文缩略语(Abbreviation)全拼含义Avianmeloblastosisvirus禽类成髓细胞瘤病毒BovinesenHnalbumin3,3-diaminobenzidineDiethylpyrocarbonateEthylenediaminetetraaceticacidEnzymelinkedinununosorbontassayHumanparainfluonzav

2、irusesHemagglutinin-neuraminidaseHorseradishpero)【i出眵eIsopropyl·-13·-D-thiogalaetosideImmunoglobulinG直链淀粉树脂牛血清白蛋白3，3．二氨基联苯胺焦碳酸二乙酯乙二胺四乙酸酶联免疫吸附试验人副流感病毒血凝素神经氨酸酶辣根过氧化物酶异丙基一13一D-硫代半乳糖苷免疫球蛋白GLuriabrothLB培养基Matrixprotein基质蛋白Maltosebmdingprotein麦芽糖结合蛋白Monoelonalantibody单克

3、隆抗体天津医科大学硕士学位论文●fDVODPBSPcAbPCRPVDFRNAasinRTSDSNewcastlediseasevirus新城疫病毒Opticaldensity光密度Phosphate-bufferedsaline磷酸盐缓冲液polyclonalantibody多克隆抗体PolymeraseChainReaction聚合酶链反应Poly-vinylidenedifluoride聚偏二氟乙烯RNAa∞inhibitorReversetranscripti∞SodiumdodecylsulfateRNA酶抑制剂逆

4、转录十二烷基硫酸钠SodiumdodecylsulfateSDS-PAGEpolyacrylamidegel聚丙烯酰胺凝胶变性电泳electrophoresisSe_VTEMEDSendaivirus仙台病毒N，N'N’，N'-tetramethyl四甲基乙二胺ethylenediamine2学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任

5、何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：童童至日期：柳年岁月巧日学位论文版权使用授权书本人完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密团。(请在以上方框内打“√”)作者签名：逛星导师签名：丕竺鏖坐亟日期：u。，年j月药日天津医科大学硕上学位论文副粘病毒天津株HN、M基因

6、克隆与表达的研究摘要1999年6月，天津医科大学微生物教研室从急性呼吸道感染致死的灵长类动物狨猴肺组织中分离出一株高血凝效价病毒，经过一系列的研究证实为一株副粘病毒，即副粘病毒天津株。经电镜观察具有典型的副粘病毒特征。用交叉血凝抑制试验对分离毒株进行鉴定，扩增HN基因测序后，用生物信息学方法与多种核酸序列进行比较，发现该毒株与仙台病毒(SeV)特征最为接近11-3]。进一步研究发现该动物中心的工作人员都有此病毒的抗体，且在正常人群(献血员)中抗体反应也是阳性，阳性率高达46％(14／40)，提示此病原体与人类有密切的关系，

7、可能是一株人和绒猴共患的呼吸道病毒。我们现在已经完成了对该株病毒的全基因组测序，通过全基因组系统进化树分析，其与SeV同源性较高，也证明了该株病毒很可能为sev一个新的基因型。为迸一步研究该毒株的生物学特性及致病机制，本研究构建了副粘病毒天津株包膜糖蛋白删膜外区三个部分及整个M基因的原核表达质粒pET-28a-HNI、pET-28a-HN2、pET-28a-HN3及pMal-M，诱导表达、纯化了重组蛋白HNl(aa61一aa260)、HN2(aa253一aa452)、HN3(aa376-aa575)和MBP．M，并对其生物

8、学和免疫学活性进行了初步研究。我们提取病毒RNA逆转录为eDNA。根据前期研究全基因组测序中的HN、M的基因序列，设计并合成引物，以该株病毒的eDNA为模板扩增目的片段，双酶切、纯化回收含粘末端的目的片段和空质粒，在T4DNA连接酶作用下连接、转化克隆菌E．coilTOPl0。经双酶切、PCR和基因测序