应用噬菌体肽文库筛选hfrsv优势b细胞结合表位肽

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1、硕士学位论文应用噬菌体肽文库筛选HFRSV优势B细胞结合表位肽口以KI卫仃八硕士研究生：王倩指导教师：俞守义教授摘要目的应用噬菌体展示肽文库筛选鉴定肾综合征出血热病毒优势B细胞结合表位肽。方法以Protein-A纯化的肾综合征出血热病人恢复期血清为筛选配基，对经正常人血清预吸附的噬菌体展示随机12肽文库(或次级肽文库)进行生物亲和淘选：夹心ELISA、竞争ELISA鉴定所获得克隆的结合特性，并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析。结果ELISA测定显示，通过5轮淘选得到的噬菌体克隆半数以上可与筛选血清发生特异性结合；对45

2、个阳性克隆进行序列测定分析，根据其推导的氨基酸序列可大致分为8组，同源性分析显示I’Ⅶ组序列基序可能为LVXKR、LTXR、IXKP、LXPA、VGA、KXIR、EKXP，其中4组基序在病毒结构蛋白氨基酸序列中发现同源区。结论获得了一组HFRSV优势B细胞表位肽，HFRSV核蛋白可能是诱导高水平抗体的主要免疫原，研究结果为基于表位的基因工程诊断试剂的研制和多肽疫苗的设计提供依据。关键词：肾综合征出血热病毒噬菌体展示肽文库抗体表位应用噬茵体肽文库筛选HFRSV优势B细胞结合表位肽electionofHFRSV-specif

3、icepitopesby一IO"●screeningrandomoeotidelibrarieswithOmetie1iDrarlesHFRSV-positiveseraName：wangqian一buoervlsor：yuS110Uyl▲r-Abstractobjective：Toobtainthe12-merphageclonesdisplayingtheHantaanvirusmimicepitopes．Methods：HFRSV-positiveserawereusedasselectivemoleculesfo

4、rbiopanning．A12一metphagepeptidelibrarywasbio-pannedfor5rounds，andtheresultwasconfirmedbysandwichELISA，competitionELISAandDNAsequencing．Results：After5roundsofeffectivescreening，theresultsdetectedbysandwichELISAandcompetitionELISArevealedthatmajorityoftheselectedcl

5、onescouldreacttopositiveserainadose-dependentmanner,whereastheycouldnotbindtoBSAandthecontrolsera．Sequencingandalignmentanalysesindicatedthataminoacidsequencesof45positiveclonescoulddivideintoeightgroups，andsevenofthemrevealedputativemotifs：LVXKR，LTXR，IXKP、LXPA，V

6、GA，KXIRandEKXP．FouroftheputativemotifshadahomologousregionwithinstructuralproteinsofHFRSVConclusion：ThepeptidesdisplayedbyphagecanmimictheepitopesofHFRSVantigen，whichprovidesthepotentialforpreparingmoreeffectiveepitope-basedvaccineandspecificdiagnosisreagent．Keyw

7、ords：Hemorrhagicfeverwithrenalsyndromevirus；Phagedisplaypeptidelibrary；Polyclonalantibody；Epitope应用噬菌体肽文库筛选HFRSV优势B细胞结合表位肽南方医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予

8、以明确方式规定外，本研究已发表与未发表成果的知识产权均归属南方医科大学。本人承诺承担本声明的法律效果。作者签名：多缃日期：。s年石月；日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南方医科大学可