噬菌体展示肽库筛选大肠癌细胞特异性结合肽的实验的研究

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1、硕士学位论文噬菌体展示肽库筛选大肠癌细胞特异性结合肽的实验研究硕士研究生：廖康雄指导教师：吴承堂副教授姚学清副主任医师摘要目的：利用噬菌体展示肽库体外差减筛选策略，获得人源大肠癌细胞结合短肽，鉴定其与大肠癌细胞结合的特异性。方法：I：以人源大肠癌细胞株LoVo为靶细胞，人正常结肠粘膜上皮细胞为吸附细胞对噬菌体展示环七肽库进行差减筛选。II：体外筛选3轮后，随机挑取20个噬菌体克隆，以细胞ELISA法鉴定其与大肠癌细胞LOV0结合的特异性，排除假阳性或非特异性结合的噬菌体。111．．提取能与大肠癌细胞L0v0特异性结合的噬菌体阳性克隆的DNA进行测序，并进行氨基酸序列的同源性

2、分析。Ⅳ：根据细胞ELISA鉴定的结果，选取其中一个具有较高亲和力的噬菌体阳性克隆，以免疫荧光检测直观地显示其与大肠癌LOV0细胞结合情况，鉴定其对大肠癌LoVo细胞的靶向性。结果：I：经过3轮体外差减筛选，可见噬菌体在靶细胞L0v0上出现明显富集。结果表明，回收噬菌体的滴度由第一轮的5．6×106增加到第三轮的2．2X109，增加了393倍：同时，回收率也显著提高，由第一轮的2．8X10巧增至第三轮的1．1X10‘2。II：以蓝白斑实验随机挑取20个携带噬菌体的大肠杆菌克隆，经细胞酶联免疫分析(Cell．ELISA)鉴定显示，能与大肠癌LOV0细胞较好结合的克隆有7个，分

3、别P1、P3、P10、P13、P14、P15、P20。其中能与大肠癌细中文摘要胞LoVo特异结合丽不与人正常结肠糕膜上皮细胞结会的克隆有P1、P10、P13、P14、P20。说明最终获得的这5个克隆是与犬肠癌Lovo细胞特异性结合的噬菌体阳性竟隆。Ⅲ：本研究所获S个阳性噬菌体克隆，测序后经分析5个肽序列中富含大量的脯氨酸，占28．6％(10／35)，它们的氨基酸序列具有一定的同源性，其中3个阳性克隆含有共同序列RPM，这可能与大肠癌细胞表面受体结合款基序有关。IV：经Cell．ELISA鉴定，其中阳性克隆P14与大肠癌L0v0细胞结合的OD490nm最高，所阻选取P14进行

4、细胞免疫荧光检测，结果显示P14能特异靶向大肠癌细胞，而与原代培养的人正常结肠粘膜上皮细胞不结合。结论；王：本研究利用噬菌体展示肽库技术，获得了5个与大肠癌LoVo细胞特异性结合的噬菌体阳性克隆(P1、P10、P13、P14、P20)，其氨基酸序列具有共同序列RPMP。II：本研究鉴定了P14噬菌体克隆能与大肠癌LoVo细胞特异性结合，它有可能成为抑制大肠癌的靶向载体，为进一步研制大肠癌特异性靶向治疗药物奠定了初步的实验基础。关键谲噬菌俸默库LoVo细腱差减筛选大肠癌靶囱治疗Ⅱ硕士学位论文ExperimentofScreeningPeptidesBindingSpecifi

5、callytoColonCancerCellsfromPhageDisplayPeptideLibraryName：LIAOKang．xiong一Supervisor：、VUCheng—tangYAOXue．qingABSTRACTObjective：Toscreenthepeptidebindingspecificallytothecoloncancel"cellsusingphagedisplaypeptideslibraryandstudytheaffinityofthesepeptiedstocoloncancercells．Methods：I：ColonCanCe

6、rcellsLov0Wereusedasthetargetcellsandhumannormalcolonmucousepithelialcellsastheabsorbercellsforsubtractionbiopanningfromac7cphage-displaypeptidelibrary．II：Afterthreeroundsofsubtractionbiopanninginvitro，20phageclonespickedrandomlywereexaminedtheiraffinitywithcoloncancerLoVocellsbyenzyme·lin

7、kedimmunosorbentassay(ELISA)toexcludefalsepositiveclonesandnonspecificphagesbindingtotargetcellsandcontrols．1lI：TheDNAofphagepositiveclonesspecificbindingtocoloncancerLoVocellswereextractedandsequencedtoidentifytheconsensussequence．IV：AccordingtotheCell—ELISAr