盾叶薯蓣花药培养和原生质体培养

《盾叶薯蓣花药培养和原生质体培养》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文召如需保密，解密时间年月日是否保密独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意．研究生签名：j，习主霞时间：2帅‘年参月／夕日学位论文使用授权书本人完全了解。华中农业大学关于保存．使用学位论文的规定”，即学生必须按照学校要求提交学

2、位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版，并提供目录检索和阕览服务，可以采用影印。缩印或扫描等复制手段保存．汇编学位论文．本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表，传播学位论文的全部或部分内容．注：保密学位论文在解密后适用于本授权书．学位论文作者鲐同易需导师张批蓼L玲筌名日期2卯多年／月／夕日筌名日期：7彬6年‘月加日注：请将本炭直接装订色。7’伊论支的戽页丰f』目录之间华中农业大学2006年硕士学位论文盾叶薯蓣花药培养和原生质体分离摘要盾叶薯蓣(D[oseoreazingiberensisC．H．Wright)是我国特有的野生药源植物，其薯蓣

3、皂甙元含量居世界首位，人工栽培后薯蓣皂甙元含量和产量普遍下降，生物技术结合常规育种手段是解决这一问题的有效途径。本研究利用花药培养技术获得再生植株；以种子胚为外植体建立胚性悬浮细胞系，进行原生质体分离和培养；以期为盾叶薯蓣的高含和高产育种提供一个新途径。本课题对影响花药培养和植株再生的几个关键因素、影响胚性愈伤组织诱导的培养基成分、原生质体分离和培养的优化条件等问题进行了研究与探讨。主要结果如下：一、以盾叶薯蓣花药为试材，就基因型、基本培养基、激素种类和浓度、分化培养基等对花药培养和植株再生的影响进行了较为系统的研究，获得了盾叶薯蓣花药培养再生植株．(1)基本培养基的筛选取单

4、核靠边期的花药，分别接种在W14、B5、MS、N6等基本培养基中，统计花药愈伤组织诱导率，结果显示：4种基本培养基的花药愈伤组织平均诱导率分别为2．15％、0．50％、0．18％、0．10％，说明W14是适合盾叶薯蓣花药愈伤组织诱导的基本培养基。(2)基因型的差异在W14+2，4-D2．0reg．／L+KT2．0me／L+NAA0．5mg／L+60g几麦芽糖的培养基上，4种基因型的花药愈伤组织诱导率存在差异，河南南阳的材料诱导率最高达到5．20％，湖北武当山的材料诱导率只有0．80％。(3)2，4-D和Kr对花药诱导的影响湖北武当的花药愈伤组织诱导率随2，禾D浓度的升高而增大

5、，当2，缸D浓度为2mgA-．时诱导率达到最高；诱导率随着嗽度的升高而降低，不添加KT时诱导率最高；因此盾叶薯蓣花药愈伤组织诱导时不需要添加KT，适宜的激素为2，4．D2mg几。但不同基因型对这2种激素的反应有明显差异。(4)分化培养先将花药愈伤转入芽分化培养基，待分化出芽后将其转移至生根培养基。芽分化基本培养基为MS，适宜的激素组合为BA2．0mg皿+IAA0．2mg：t．。筛选的生根培养基为1／2Ms+mA2．0mg／L+NAA0．4mg几+活性碳0．5me／I．。(5)再生植株的倍性鉴定：对33个花药愈伤组织或再生植株的流式细胞仪检测，有4株为单倍体；对24个花培植株根

6、尖的染色体计数，有2株为单倍体。花药培华中农业大学2006年硕士学位论文养再生植株的单倍体比例为8．00％．12．00％。二、盾叶薯蓣胚性愈伤组织诱导与原生质体分离(1)愈伤组织诱导以种子胚为外植体，在MS基本培养基上添加2,4．D1．0nlg[I．A-BA0．2mg／L，3种基因型之间愈伤组织诱导率存在明显差异，其诱导率分别为100．00％、53．54％、43．86％。3种基因型种子胚诱导的适宜培养基：“03．442号”为MS+2，4．D1．0rag／L+BA0．2toga-+NAA0．2mg／L；“03-415号”为MS+2，4-D1．0mg／L+BA0．2mg／L+NA

7、A1．0rag／L：“504号”为MS+2,4一D1．0rag／L+BA0．2m班。(2)愈伤组织状态改良以“504号”愈伤为材料，筛选出适宜的增殖继代培养基：MS+KT0．2mg门L+2,4-D1．0mg／I．A-(NH4hS04495mg几，培养基中增大(NI-h)2SO。浓度可减缓愈伤组织生长速度，使其呈颜色鲜黄、结构松散的颗粒状，继代周期为30-40d，此外诱导时培养基中添加适量的NAA或以KT0．2m刚¨NAA1．0mg／L4-℃替BA0．2mg／比可改善愈伤组织的状态。(3)原生质体分离：在