人子宫内膜对胚胎接受性初步的研究

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1、中山大学硕士学位论文中文摘要人子宫内膜对胚胎接受性的初步研究专业：妇产科学硕士生：谭真导师：李洁副教授摘要人类子宫内膜对胚胎的接受性存在时间和空间的短暂性，即胚胎着床活动受到“种植窗”的限制，“种植窗”的启动常常发生在内源性黄体生成素(1uteinizinghormone，LH)峰或使用外源性人绒毛促性腺激素(humanchorionicgonadotropin，hCG)(LH的类似物)或黄体酮的第4-5天，关闭发生在第9-10天。进入到宫腔的胚胎和子宫内膜按一定的时、空顺序分泌相关蛋白或／和局部因子从而达到相互识别、相互融合完成着床过程。胚胎

2、着床过程的限速步骤是胚胎发育与子宫内膜向接受态转化过程同步。而LH峰是促进卵子成熟、胚胎发育和子宫内膜向接受态同步转化的、最关键的调节因素。如何评估胚胎发育与子宫内膜向接受态同步转化是预测胚胎着床成功与否的重要指标。现行评估胚胎发育潜能的方法包括胚胎形态学评分和生化指标检测。然而胚胎评分与胚胎发育潜能并不完全正相关；胚胎分泌的细胞因子和蛋白类物质参与自身发育调节和胚胎着床过程，被预测可能用来衡量胚胎发育潜能的标志物。本论文将在我们前期工作基础上进一步进行人类卵母细胞和种植前胚胎LH表达的研究，为探讨LH在人类卵子和胚胎发育过程中的调节作用提供实

3、验依据。上个世纪五十年代开始，学者们就从组织形态学、亚细胞结构、局部因子表达及其类固醇激素的调节作用等层次对子宫内膜胚胎接受性的评价方面做了大量研究，提出上皮细胞吞饮泡(pinopod)、整合素aul33、白血病抑制因子(LIF)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达部分地反映子宫内膜对胚胎的接受性。但由中山大学硕士学位论文中文摘要于在胚胎移植周期子宫内膜活检取材的不现实性、被研究因子的独立与局限、研究方法缺乏时、空连续性以及多因子表达的同期比较，其结果不足以真实地反映“种植窗”时期的标志物，也不能解释在子宫内膜形态与功能转化过程中局部因子的网络

4、联系和调节机制。至今为止，还未能找到一种标志物明确地用于临床实践评价子宫内膜对胚胎的接受性，选择胚胎移植时机。子宫内膜对胚胎接受性的功能改变是一个由多基因参与、连续动态的复杂过程，不同功能的蛋白质在时间与空间上有序协同作用的结果。蛋白质组学技术具有观察多基因事件引起的蛋白质组分整体变化、进行时间与空间连续研究的独特优势为研究“种植窗”时期子宫内膜蛋白质表达的变化提供了优良的技术平台。本论文采用荧光差异凝胶电泳(two．dimensionalfluorescencedifferencegelelectrophoresis，2D．DIGE)和基质辅

5、助激光解吸／电离飞行时间质谱(Matrix-assistedlaserdesorption／ionizationtime—of-flightmassspectrometry，MALDI．TOF．MS)建立了正常生育能力妇女“种植窗”时期子宫内膜蛋白质组学研究体系和蛋白质表达谱，初步鉴定了32个差异表达蛋白，为进一步筛选“种植窗”时期标志蛋白，揭示子宫内膜对胚胎接受性调控的分子机制提供有力的基础实验依据。第一部分黄体生成素在人类卵母细胞和种植前胚胎的表达研究目的人类卵母细胞和种植前胚胎LH的表达。研究方法采用免疫荧光标记、激光共聚焦显微镜观察体内

6、成熟和不成熟卵母细胞以及种植前胚胎LH的表达。研究结果1．人类卵母细胞和种植前胚胎均存在LH的表达，表达强度随胚胎发育加强。中山大学硕士学位论文中文摘要2．体内不成熟、成熟卵母细胞、2-8细胞阶段的种植前胚胎LH主要分布在细胞膜，细胞连接处表达降低；桑葚胚、囊胚细胞膜和细胞浆同时存在LH表达。3．多精受精和正常受精组、新鲜胚胎和冻融胚胎组LH表达率无统计学差异。第二部分人类“种植窗’’时期子宫内膜的蛋白质表达研究研究目的1．建立人类“种植窗”时期子宫内膜蛋白2D-DIGE和MALDI—TOF-MS研究体系。2．获得正常生育妇女“种植窗”时期子宫

7、内膜蛋白质20一DIGE图谱。3．利用质谱技术鉴定差异蛋白，探讨它们与“种植窗”的关系。4．选取其中卜2个差异蛋白进行“种植窗”时期在体子宫内膜组织表达的定位和半定量验证。研究方法1．4例正常生育能力妇女志愿进入本研究，采用经阴道超声检测卵泡发育，结合血、尿LH激素测定确定LH峰日。2．通过组织微创活检分别获取“种植窗”前(LH+2天)和“种植窗”时期(LH+7天)的子宫内膜组织样本8份，每份样本分为两部分：一部分制备组织切片，行HE染色内膜形态学检查，采用免疫组化SP法检测雌激素受体(estrogenreceptor，ER)、孕激素受体(pr

8、ogesteronereceptor，PR)；另一部分经纯化、提取总蛋白样品。3．蛋白样品Cydye染料标记后进行双向电泳(two．dimension