α晶体蛋白保护视网膜神经节细胞存活及抑制小胶质细胞活化的在体的研究

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1、第三军医大学硕士学位论文α-晶体蛋白保护视网膜神经节细胞存活及抑制小胶质细胞活化的在体研究摘要目的观察静脉注射α-晶体蛋白对大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞(retinalganglioncellsRGCs)存活和小胶质细胞(RetinalmicrogliacellsRMGs)活化以及对重要脏器的影响研究。方法1、荧光金经双侧上丘及外侧膝状体逆行标记RGCs，7d后制作视神经钳夹伤模型。-2视神经钳夹伤后经尾静脉分别注射1.25ml等渗生理盐水、1×10g/Lα-晶体蛋白、1-1×10g/Lα-晶体蛋白及1g/Lα-晶体蛋白，每2天重

2、复注射1次，共7次。伤后2周对实验大鼠行RGCs及RMGs计数，并对肝、肾、脑、脾、肺等重要脏器进行病理观察。-12、在视神经损伤模型，尾静脉注射浓度1×10g/L的α-晶状体蛋白，注射方法同前，运用荧光金逆行示踪标记、视网膜铺片及免疫组织化学技术，观察视神经损伤2周及4周对RGCs存活及RMGs活化的影响。结果-2-11、视神经钳夹伤后2周RGCs数显著下降，3个不同浓度(1×10g/L、1×10g/L、1g/L)α-晶体蛋白组存活的RGCs数均显著高于生理盐水对照组(P<0.01)，3个不同浓度α-晶体蛋白组活化的RMGs数均显著

3、低于生理盐水对照组(P<0.01)。-2-12、静脉注射3个不同浓度(1×10g/L、1×10g/L、1g/L)α-晶体蛋白在视神经钳夹伤后2周对重要脏器(肝、肾、脑、脾、肺)的病理观察未见充血、肿大、炎症等病理改变。-13、视神经损伤2周及4周，1×10g/Lα-晶状体蛋白组存活的RGCs数均显著高-1于生理盐水对照组(P<0.01)。伤后2周，1×10g/Lα-晶状体蛋白组活化的RMGs数显著低于生理盐水对照组(P<0.01)，而伤后4周，2组间RMGs数无统计学差异(P>0.05)。4第三军医大学硕士学位论文结论1、α-晶体蛋白

4、静脉注射给药途径对视神经损伤2周及4周RGCs存活具有一定保护作用，表明静脉注射是α-晶体蛋白应用的一条有效途径。2、静脉注射α-晶体蛋白能够抑制视网膜小胶质细胞反应，视神经损伤后2周小胶质细胞的增殖活化被抑制。3、本研究所用静脉注射α-晶体蛋白的浓度不会引起大鼠重要脏器大体及光镜下的病理性改变。4、运用荧光金联合免疫组化双重标记小胶质细胞能够较为准确的对视神经损伤后活化的小胶质细胞进行计数，是研究小胶质细胞更准确有效的方法。关键词：α-晶状体蛋白,视网膜神经节细胞,小胶质细胞，荧光金，视神经损伤5第三军医大学硕士学位论文Effect

5、sofα-crystallinonthesurvivalofretinalganglioncellsandinhibitionofactivedmicrogliainvivoAbstractObjectivesToinvestigatetheeffectsofα-crystallineonthesurvivalofretinalganglioncells(RGCs)throughintravenousinjection,anditsinhibitionofactivedretinalmicrogliacells(RMGs),andth

6、eeffectofα-crystallineintravenousinjectiononsomeimportantorgansoftheLongEvansratsafteropticnerveinjury.Methods1．RGCswereretrograde-labeledbyfluorogoldthroughbilateralsuperiorcolliculusandlateralgeniculatebodyforsevendaysbeforeopticnervecrushinjury.Tailveininjectionwaspe

7、rformedwith1.25mlofisotonicsalineandthreedifferentconcentrations-2-1(1×10g/L,1×10g/Land1g/L)ofα-crystallinrespectively,onceeverytwodaysandtotallyseventimes.Aftertwoweeks,thelabeledRGCsandRMGswerecounted,andthepathologicalchangesonliver,kidney,brain,spleenandthelungswere

8、investigated.2．ToevaluatetheeffectofsurvivalofRGCsandactivedmicrogliabymeansof-1intravenousinjectionof1×10g/Lα