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《白腐菌漆酶的制备、催化聚合的的研究与漆酶基因克隆的初探》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、摘要型物，在曝气的条件下，研究白腐菌TrameteshirsutaBYBF产漆酶对2,4-DCP的去除效果：研究发现2,4-DCP的去除率随反应时间的延长而增大，在适宜的条件下，当底物浓度为10mM/L时，曝气20h后去除率就可以达到93.6%。此外，2,4-DCP的去除效果也受到反应体系的温度、pH值等因素的影响，在温度和pH是25℃-45℃和pH4-6范围内是具有较好的去除效果。在最适条件下曝气20h，纯化漆酶和粗漆酶液对2,4-DCP的去除率分别为84.9%和93.6%，这就说明纯化漆酶要比粗酶液处理酚类物质的效果要差一些。
2、最佳条件下，在漆酶的作用下曝气10h，经蛋白酶和水洗处理后，测得聚合物的分子量为2838（二氯代酚的分子量为163），可见漆酶对2,4-DCP有很好的催化聚合作用。13用红外和C-NMR对处理后的聚合产物的结构进行了分析，产物是带有酚羟基的高分子聚合产物，并且聚合产物上的苯环在漆酶的作用下会发生开环反应产生带羧基的脂肪族侧链。推测其催化聚合反应机理可能是首先生成酚氧游离基，游离基之间相互结合生成二聚体或三聚体，然后发生电子转移，进一步脱氯生成相对稳定的低分子聚合物，低分子聚合物之间也能发生脱氯聚合生成高聚物，最后高分子聚合物中部分
3、苯环会发生开环反应，生成羧酸类物质。此外，底物之间还能发生交叉偶联，生成复杂的交联产物，这样就可以使有毒的酚生成疏水性高聚物通过沉淀而除去。此外，还成功地用CTAB法提取了此白腐菌的DNA，提取RNA并经琼脂糖凝胶电泳检测，电泳图谱表明分离得到了高纯度的DNA和RNA，满足了分子生物学对基因片段的要求，根据实验要求，设计并合成了漆酶基因的简并引物，通过RT-PCR的方法成功扩增了漆酶的基因，并分析确定克隆得到的漆酶基因，将目的基因与载体pMD19-T连接并转化到大肠杆菌上，通过蓝白斑实验确定阳性克隆，回收目的片段并进行测序，得到一
4、段长度为2154bp的核苷酸序列。利用ClastalW软件对克隆得到的漆酶基因片段进行同源性比较，发现在核苷酸酸序列与血红密孔菌、栋迷孔菌、环带干酪菌与朱红密孔菌同源性均较高同源性分别为98%、99%、99%，而北方梭囊孔菌、单色下皮黑孔菌同源性较低，分别为59%、43%。关键词：白腐菌；流化床反应器；漆酶；废水；漂白；克隆II山东轻工业学院硕士学位论文ABSTRACTLaccases(benzenediol:oxygenoxidoreductaseEC.11.0.32)isatypeofmulticopper-containin
5、gpolyphenoloxidases,Ithashighredoxpotentialandwillbecapableofoxidizingawiderangeofpolyphenols.Ithasvariouspotentialapplicationsinseveralareassuchasenvironmentalprotection,pulpandpaperindustry,foodprocessing,organicsynthesisandotherfields.Themainpurposeofthisresearchis
6、efficientproductionoflaccase.Somesystematicstudyandanalysishavebeencarriedoutaboutthecharacteristicsoftheobtainedlaccase.TheexpandedcultureofTrameteshirsutaBYBF,laccasepurificationandcharacterization,applicationsoflaccaseinthechlorophenolwastewaterhavealsobeeninvestig
7、ated.ThegeneofthislaccasefromTrameteshirsutaBYBFwasalsocloned.Fluidized-bedbioreactorhastheadvantagesofsimplestructure,highoxygentransferefficiency,highstartingspeed,smallshearforce,andsoon.Theuseofmycelialpelletsinthefluidizedbedforlaccasecouldmakemycelialpellets,the
8、fermentationliquidandoxygencontactfully,andsotheprocessoflaccasefromthewhiterotfungicouldbepromotedgreatly.Athree-phasefluid
