马氏珠母贝抗菌蛋白的分离和活性的研究

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1、摘要马氏珠母贝具有很强的抗病能力，对其抗菌蛋白的类型、活性以及抑菌作用尚未见系统的研究报道。本文采用冰醋酸提取法分离获得了抗菌蛋白，并对所分离的抗菌蛋白的理化性质和抑菌活性进行了分析。1．马氏珠母贝抗菌成分的分离纯化取马氏珠母贝(砌c纽如^亿腕幡豇)的鳃，匀浆后取上清液。利用DEAESephadexA-50和SephadexG．75，对匀浆物进行分离纯化。经D础也sephadeXA．50阴离子交换层析，共得到五个组分峰，第1、lI峰为穿透峰，Ⅲ．V峰为洗脱峰，经抗菌活性粗筛，洗脱峰第V峰(收集管7

2、4．81)抗菌活性较强，收集该组分峰。将该组分峰进一步用S印hadexG-75凝胶过滤层析分离，共得到两个组分峰，其中第1I峰(收集管IO啦!02)抗菌活性较强。经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS．PAGE)，电泳图谱显示为单一的蛋白质条带，分子量约30000Da，将其命名为PM舢。2．马氏珠母贝抗菌成分的抗菌活性研究用纸片琼脂扩散法测定了马氏珠母贝鳃的匀浆物的抗菌活性。测试菌株包括革兰氏阴性菌，大肠埃希氏菌(西幽P，瑚缸∞切、绿脓杆菌∞P谢b小D嬲韶哪l伽)、嗜水气单胞菌似e加mD，娜111)砌叩lI

3、I溯、河流弧菌(所毓M蚴、副溶血弧菌(Vf聃D删绷06碱c搬)，和革兰氏阳性菌，金黄色葡萄球菌@印，砂fD∞cc淞口姗邮)、枯草芽胞杆菌仍口c讲淞s砌凰)。实验结果显示，当样品浓度为OD2∞=1．3时，对革兰氏阴性菌除副溶血弧茵的抑菌圈直径达铀吼外，对其它各菌抑菌圈直径达均llmm以上。对革兰氏阳性菌，金黄葡萄球菌的抑菌圈直径达10n[蛐，但对枯草芽胞杆菌无抑制作用。利用微量稀释法测定纯化的PM．AMP对以上各菌的抑菌活性。实验结果表明，PM一伽具有广谱抗茵活性，对革兰氏阴性菌和阳性菌均有明显的抗

4、菌作用，但对枯草芽胞杆菌无抑制。用微量稀释法分别测定了纯化的抗菌肽最低抑菌浓度MIC(Ilmol／L)，抗菌肽对四种标准菌株大肠埃希氏菌、绿脓杆菌、嗜水汽单胞菌、金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌的MIC(嵋／mL)分别为100焰，mL、100pg，mL、200昭／InL、500p咖L和750p咖L。溶血实验结果显示，PM．黼具有较弱的溶解鱼红细胞的作用，具有一定的应用前景。关键词：马氏珠母贝；蛋白；分离纯化；抗菌活性ABSTRACTA砒胁m哪豇h笛s仃0nga而vil锄abili够ne删db硼dyn锄妇

5、hadnot1．0Ⅶd，锄dthe锄tibact谢almcc：hallisl璐ofa而bact甜alp印tideshaddiSput酣．Inthispap％aceticacid啄蛔硝0nmetIlodh勰b咖璐cdt0gct删bact酣al州ein．Ph蜘c0ch锄icaJ阳)peni骼缸d砌acterial如缸vityofPj眦dh肘a，蛔帖豇西llwe∞also锄alyzed．1．Sep锄tion锄dp谢ficationof锄曲砌甜alp印tid懿舶m胁如^彻，fe邶豇The电b蚰嚣powde

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