肠道益生菌对凡纳滨对虾非特异性免疫功能和抗病力影响的研究 (1)

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1、上海海洋大学硕：匕学化论文肠道益生菌对凡纳滨对虾非特异性免疫功能和抗病力影响的研究摘要本论文通过养殖试验和WSSV攻毒实验分析了5株对虾肠道益牛菌对凡纳滨对虾非特异性免疫功能和抗病力的影响。研究分为4部分：第一部分是在基础饲料中分别添加0．1％美人鱼发光杆菌灭活菌、1％美人鱼发光杆菌灭活菌和0．1％美人鱼发光杆菌活茵配制成三种免疫实验饲料，以基础饲料为空白对照组饲料，每处理设3个平行样。对体质量为(4．83±0．36)g的凡纳滨对虾进行为期20天的饲养实验，分别在0、5、10、15和20d进行取样，以血清中的

2、酚氧化酶活性(PO)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)和溶菌酶活性(UL)为免疫指标，探讨了美人鱼发光杆菌作为免疫制剂对凡纳滨对虾非特异性免疫效应的影响；并在投喂免疫饲料后的第22d，按4．29．kg。1体重的剂量，直接投喂对虾白斑综合征病毒(WhiteSpotSyndromeVirus，wSSV)病料，记录wSSV感染14d内凡纳滨对虾的累积死亡率。结果表明，美人鱼发光杆菌对凡纳滨对虾血清中PO、ACP、AKP、UL、SOD等活性有显著或极显著的影响(尸<0．05或P<0

3、．01)，明显提高了对虾抵御WSSV感染的能力，其中0．1％美人鱼发光杆菌活菌实验组的抗病毒感染能力最强，WSSV感染14d内累计死亡率为63．3％±5．8％，而对照组为96．7％±7．3％。实验表明，在适宜范围内，美人鱼发光杆菌在一定程度上能提高凡纳滨对虾非特异性免疫水平和增强抵抗疾病的能力，其作为对虾免疫增强剂具有良好的应用前景。第二部分是在B组基础饲料中分别添加了0．1％和1％大黄鱼弧菌灭活菌,NN和0．1％活菌配制成三种免疫实验饲料；C组基础饲料中分别添加了0．1％和1％鞘氨醇单胞菌灭活菌制剂和0．1

4、％活菌配制成三种免疫实验饲料；以基础饲料为空白对照组饲料，每处理设3个平行样。对凡纳滨对虾体长(11．00±1．18)cm，体质量(12．12±0．36)g，进行为期20天的饲养实验，分别在0、5、10、15和20d进行取样，以血清中的酚氧化酶活性(P0)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)和溶菌酶活性(uL)为免疫指标；并在投喂免疫饲料后的第22d，按4．29．kg。体重的剂量，直接投喂对虾白斑综合征病毒(WhiteSpot上海海洋大学硕：I：学位论文SyndromeVir

5、us，WSSV)病料，记录WSSV感染14d内凡纳滨对虾的累积死亡率。结果表明，除了个别情况外，大黄鱼弧菌和鞘氨醇单胞菌对凡纳滨对虾血清中PO、ACP、AKP、UL、SOD等活性有显著或极显著的影响(尸

6、础饲料中，以0．1％和l％灭活菌及0．1％活菌添加配制成三种免疫饲料试验组，并以基础饲料为空白对照组，每处理设3个平行样。对体质量为(4．83±0．36)g的凡纳滨对虾进行为期3周天的饲养试验和两周的WSSV攻毒试验，每5d取样1次，检测凡纳滨对虾血清的溶菌酶、酚氧化酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶，探讨两株益生菌对凡纳滨对虾非特异性免疫的影响。结果发现：PC070573的三个免疫组中1％灭活菌组的各项免疫指标较高，LV060810的三个免疫组中0．1％活菌组的各项免疫指标较高；但免疫保护率前者远远

7、高于后者。第四部分是在凡纳滨对虾的基础饲料中添加了0．1％和1％大黄鱼弧菌灭活菌制剂和0．1％活菌配制成三种免疫饲料试验组，并以基础饲料为空白对照组，每处理设3个平行样。对凡纳滨对虾进行为期20天的饲养实验，分别在O、5、10、15和20d进行取样，以血清中先天免疫相关基因(Toll受体和热休克蛋白)为免疫指标，采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)年tl荧光定量PCR的方法，进行基因的mRNA表达检测，并以13．actin为内参照进行基因表达水平的定量分析。结果显示，三个试验组中0．1％活菌制剂组的凡纳滨对

8、虾血清中基因的mRNA表达显著高于对照组(p<0．05)，说明益生菌一大黄鱼弧菌可提高凡纳滨对虾免疫相关基因mRNA的表达量，表明在饲料中添加肠道益生菌有利于凡纳滨对虾的生长和抗病、抗逆功能的增强。关键词：凡纳滨对虾，益生菌，非特异性免疫，抗病力，WSSVⅡ上海海洋大学硕t-_学位论文EffectofintestinaIbeneficiaIbacteriaofshrimpsonthenon—spec