twist基因表达和肿瘤细胞转移、浸润和耐药性的相关性初探

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1、Twist基因表达与肿瘤细胞转移、浸润和耐药性的相关性初探摘要．目的：应用逆转录聚合酶链式反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT-PCR)方法，检测转移能力不同的两种人乳腺癌细胞株MCF．7和MDA．MB．435S中twist基因的表达情况，应用MTT法检测以上两种细胞对紫杉醇的敏感性，探讨两种细胞株twist基因表达差异与其药物敏感性差异的相关性。应用免疫组化技术，检测人肾癌组织不同区域的Twist蛋白、多要耐药相关蛋白(multidrugresistance．a

2、ssociatedprotein，MRP)、P糖蛋白(P-gp)、肺耐药蛋白(1ungresistance---relatedprotein，LRP)、拓扑异构酶II(TOPOII)表达情况，探讨Twist在肾癌组织中的表达情况，以及与几种耐药蛋白表达之间的相关性。方法：①培养MCF．7和MDA．MB．435S细胞，总RNA提取试剂盒提取两种细胞的总RNA。经紫外分光光度计检测OD260／OD280的比值及两种细胞中总RNA的含量，计算出两种细胞RNA的浓度。1％的琼脂糖凝胶电泳检测提取得总RNA分子的完整性。采用逆转录试剂

3、盒和随机引物将总RNA逆转录成cDNA，然后进行体外PCR扩增，以GAPDH基因为内参照进行标准化。应用凝胶成像系统、荧光化学发光分析仪和QuantityOne软件进行分析。②培养的MCF．7和MDA．MB．435S细胞分别分为对照组、紫杉醇试验组，每组3复孔，各组细胞培养2d后，对照组更换培养基，试验组更换为含有紫杉醇的培养基，分别于加药物后6h、12h、24h、36h、48h和72h加入MTT，避光培养4h，然后倾去培养基，加入DMSO，水平振荡10min后1于酶标仪检测吸光度。③收集的人肾癌组织经固定、脱水、浸蜡、包埋

4、、常规4I_trn石蜡切片后，行Twist蛋白、MRP、P-gP、LRP、TOPOII免疫组织化学染色。鼠抗人拓扑异构酶(TOPO)IIQ抗体滴度1：20、鼠抗人肺癌耐药蛋白(LI冲)抗体滴度1：20、鼠抗人多药耐相关蛋白(MRP)抗体滴度1：50、鼠抗人P糖蛋白(P．gp)抗体滴度1：20、兔抗人Twist抗体滴度1：500。为排除肾组织中的生物素干扰，设置阴性对照。免疫组织化学染色后对结果进行图像分析。结果：@RT-PCR结果显示：两种细胞中均有twist基因表达，但是Twist在具有高转移性MDA．MB．435S细胞中

5、的表达高于在具有中等转移性MCF．7细胞中的表达(尸

6、II均为阳性表达，而在肾癌组织中心组，Twist蛋白和P．gP的表达为阴性，MRP、LRP、TOPOII蛋白在肿瘤中心仍为阳性表达，但MRP和TOPOII两种蛋白在肿瘤中心表达强于在肿瘤周边的表达(氏O．01)，而LRP蛋白在肿瘤中心的表达弱于在肿瘤周边的表达(尸

7、肿瘤细胞转移能力呈正相关性，与肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性成负相关，肿瘤细胞的转移性能可能与其药物耐药性具有一致性；@Twist蛋白在肾癌组织的边界区表达高于癌组织中心区，提示：Twist蛋白的表达可能与肾癌细胞的侵袭能力具有相关性；③在肾癌组织中Twist蛋白的表达部位和表达量与耐药蛋白P—gP、LRP的表达具有同步性，提示twist基因的表达与肾癌组织的耐药性相关；@Twist基因的表达与肿瘤转移、浸润以及耐药性存在相关性。关键词：Twist；肾癌；耐药性；紫杉醇；乳腺癌PreliminaryStudiesofcorrela

8、tionsbetweenTwistexpressionandtumormetastasis,infiltrationanddrugresistanceAbstract：0bjective：ToexploretherelevancebetweenTwistgeneexpressionandt