增殖抑制基因hsg与乳腺癌浸润和转移的相关性论文

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1、增殖抑制基因HSG与乳腺癌浸润和转移的相关性论文付玉环姜广建夏庆安【摘要】目的：研究增殖抑制基因（HSG）在乳腺癌组织中的表达，探讨其与乳腺癌发生、发展、浸润和转移的关系.方法：采用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）和蛋白印迹（分期等无相关性（P0.05）.结论：乳腺癌患者HSG的低表达，更易发生淋巴结转移.freelRNA及其蛋白在乳腺癌、乳腺增生、乳腺纤维腺瘤和癌旁正常乳腺组织中的表达，以探讨其与乳腺癌发生发展和浸润转移的关系.1材料和方法1.1材料收集200505/200612唐山市工人医院手术切除的乳腺癌标本46例，年龄53.5（25～69）岁；乳腺纤维腺瘤标本30例，年龄46.2

2、（23～54）岁；乳腺增生组织标本27例，年龄41（29～51）岁.同时收集200601/200606唐山市工人医院手术切除远离乳腺癌病灶（距肿瘤边缘3cm,经病理证实无肿瘤浸润）的相对正常乳腺组织标本18例，年龄57（45～69）岁.所有病例均为女性，临床资料完整，并经病理诊断证实，术前未接受过放疗或化疗.在乳腺癌标本中，浸润性导管癌41例，浸润性小叶癌3例，小叶原位癌2例，采用ScarfffBlormRichardson分级［2］方法进行组织学分级，其中Ⅰ级（高分化）19例，Ⅱ级（中分化）15例，Ⅲ级（低分化）12例.所取新鲜标本在术后1.5h内存放于-70℃液氮保存待用.TRIz

3、olRNA总提取试剂，2×TaqDNA聚合酶及焦炭酸二乙酯（DEPC）（北京天为时代科技有限公司）；MMLV逆转录试剂盒，dNTP,RTase,RNaseH,硝酸纤维素膜（普洛麦格北京生物技术有限公司）；兔抗人HSG多克隆抗体，由北京大学陈光慧教授馈赠；二步法PV9000试剂盒，DAB显色液及枸橼酸盐（北京中杉金桥生物技术有限公司）；Bradford蛋白定量试剂盒（北京天根生物技术有限公司）.1.2方法1.2.1逆转录聚合酶链反应（RTPCR）①组织总RNA的提取参照TRIzol试剂说明书进行；②RT:HSG基因引物序列：P1：5′CCCCCTTGTCTTTATGCTGCTGATGTT

4、3′；P2：5′TTTGGGAGAGGTGTTGCTTATTTC3′，扩增片断为168bp.内参照采用人βactin基因，其引物序列：P1：5′CTACAATGAGCTGCGTGTGG3′，P2：5′AAGGAAGGCTGGAAGAGTGC3′，扩增片断为498bp.引物由上海生工生物工程技术有限公司合成，PAGE纯化.RT参照MMLV逆转录试剂盒说明书进行；③PCR:反应体系25μL，每管加入2μLRT产物作为模板，10pmol特异性HSG或βactin基因上下游引物1μL，12.5μL2×TaqPCRMasterMix和8.5μLDD：DNAmarker.图1HSGmR

5、NARTPCR部分产物琼脂糖电泳图（略）1，2：乳腺癌组织；3，4：乳腺纤维腺瘤组织；5，6：乳腺增生组织；7，8：癌旁正常乳腺组织.图2itofusin2，Mfn2）,其全长cDNA序列为4.16kb，开放阅读框架可编码757个氨基酸残基的蛋白质.HSG定位于线粒体外膜［3-4］，广泛分布于人、大鼠和小鼠的不同组织中，尤其在心肌和骨骼肌中表达非常丰富［3,.freeloothMuscleCell,rVSMC)增殖的抑制作用是通过RasRafMEKERK1/2信号转导途径有效地阻遏细胞周期来实现的.有研究［6］表明，HSG在不同来源的肿瘤细胞系都有不同程度的表达，其肺腺癌（A549）

6、内源性HSG表达水平较低，而宫颈癌（HelaS3）细胞系表达水平较高.我们的研究结果证实，HSG在基因和蛋白水平表达基本一致，HSG在癌旁正常乳腺组织中有较高的表达，其阳性率明显高于乳腺癌组（P0.05）.并且，HSG的表达与临床病理参数的相关性分析表明，在24例淋巴结转移的患者中仅有8例HSG的阳性表达，而且随着肿瘤分化程度的降低，HSG的表达呈减弱趋势，且差异有统计学意义（P0.05）.这提示HSG与乳腺癌的发生发展有着密切关系，HSG低表达的患者，乳腺癌组织分化更低，更易发生淋巴结转移.其具体的作用机制可能是乳腺癌组织中HSG的低表达，使正常的细胞增殖分化转变为增殖分化不良，或者降低了对

7、此增殖分化不良的抑制作用，导致细胞恶性增殖，从而促进乳腺癌的发生和转移.Karbouski等［7］研究发现，几乎在所有的凋亡细胞中HSG与Bax共定位.李俐等［8］的研究发现，高表达Mfn2基因促进rVSMC的凋亡.由此推测在乳腺癌组织中，HSG的低表达抑制了肿瘤细胞的凋亡，促进了肿瘤的发生［9］，与Mfn2可诱导乳腺癌细胞系MCF7细胞的凋亡有关.综上所述，尽管HSG对肿瘤的抑制作用的具体机制