瘦素、胰岛素及igf-2对滋养细胞中pkb和p-%2770-s6k蛋白表达的影响及信号传导途径

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1、·中文论著摘要·瘦素、胰岛素及IGF．2对滋养细胞中PKB和P70S6K蛋白表达的影响及信号传导途径目的出生体重与成年疾病密切相关，大量研究表明影响出生体重的因素主要包括：营养因素、胎盘的结构和功能、生长因子以及激素。其中影响出生体重的多种生长因子和激素中最有代表性的是瘦素、胰岛素及胰岛素样生长因子．2(IGF．2)。但它们影响出生体重的信号通路仍不十分明确。越来越多的研究发现P13舯KB／mTOR信号传导通路可通过调节其下游p70S6K蛋白的表达和活性，调节滋养细胞的生长和分化。本研究通过瘦素、胰岛素及IGF．2对滋养细胞中P

2、KB和P70S6K蛋白表达的影响，以及这一信号通路中P13K的特异性抑制剂LY294002和mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素(rapamycin)对PKB和p70S6K蛋白表达的调节作用，探讨瘦素、胰岛素及IGF．2对出生体重的影响是否同P13K／PKB／mTOR信号途径存在联系。材料与方法正常妊娠妇女进行人工流产手术时获取的绒毛组织，用0．25％胰酶4℃消化约40min。离心后加入25IU／mlDNaseI作用10～15min。100目滤网过滤，用2．5％和1．25％的BSA密度梯度沉降45min，收集下层滋养细胞离心后接种于预

3、先涂有I型胶原的培养皿中。37"C含5％C02湿度为99％的孵箱中培养。根据细胞生长情况2～3d换液一次。取生长状态较好的滋养细胞血清饥饿24dx时后换成含10％胎牛血清的DMEM培养液，分别给与瘦素10nmo／L；胰岛素6nmol／L；IGF．225nmol／L作用24d',时。另一组同时分别加入LY29400220umol／L；rapamycinlOOnmol／L作用24d,时后收集细胞(5．6x106)备用。将收集的细胞按凯基全蛋白提取试剂盒步骤加提取液。考马斯亮蓝法蛋白定量，应用Westernblot技术检测瘦素、胰岛素

4、及IGF．2作用后滋养细胞中PKB和P70S6K的蛋白表达情况，以及LY294002和rapamycin对蛋白表达的影响。结果用genetoolsfromsyngene凝胶图象分析系统分析。资料以均数士标准差(x士s)表示，结果采用SPSSl3．0统计软件进行ANOVA检验，P

5、达均明显降低(均P<0．05)。结论耋口F匕l、瘦素、胰岛素及IGF．2可促进滋养细胞中PKB和pToS6K蛋白的表达，并且这种作用可被P13K／PKB／mTOR信号传导通路的特异性抑制剂LY294002和rapamycin所抑制。2、瘦素、胰岛素及IGF．2对出生体重的影响可能部分是通过P13K／PKB／mTOR信号通路实现的。关键词瘦素；胰岛素；IGF．2；滋养细胞；PKB；p70S6K2·英文论著摘要·Theeffectsofleptin，insulinandIGF一2ontheexpressionofPKBandp70$

6、6Kproteininthetrophoblasticcellsandthesignalingpathwayob．iectiveSincethebirthweightiscloselyrelatedtoadultdiseases，Presentinvestigationsonthebirthweightindicatedthatthebirthweightwasregulatedbynutrition、thestructureandfunctionofplacenta,growthfactorsandhormones，among

7、growthfactorsandhormonesthemostrepresentativefactorswereleptin，insulinandinsulin-likegrowthfactor-2(IGF一2)，thesethreefactorshavecertainregulativefunctionsinthebirthweightwhereisthemechanismforthekindofregulatoryfunctions?P13K／PKB／mTORsignalingpathwayCallregulatethegr

8、owthanddifferentiationofthetrophoblasticcellsbyregulatingthephosphorylationofp70S6K。Thisinvestigationdiscussedwhethertheeffectsofle