cx32和cx43在癫痫幼鼠海马区的表达与甘珀酸的干预作用

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1、摘要摘．要癫痫(epilepsy)是一种复杂的临床综合征，是由多种病因引起的，以脑部神经元过度放电所致的突然的、反复的、短暂的以中枢神经系统功能失常为特征的慢性脑部疾病。它是严重危害人类健康的慢性疾病之一，给社会、家庭和个人带来了难以估量的沉重的精神和经济负担，因其较高的发病率和严重的危害性，成为中枢神经系统疾患中最受关注的一组疾病。近年来，癫痫的研究在许多方面已取得了很大进展，但就其发病机制仍不是十分清楚。缝隙连接(gapjunetionGJ)为细胞膜上的一种特殊结构，是相邻细胞间唯一能直接进行能

2、量、物质和信息交换的特殊通道。信息离子，小分子物质可经过该通道进行细胞问转运。缝隙连接在神经元电活动的维持、神经元快速同步化、神经元的发育中发挥着十分重要的作用，同时还参与传递第二信使及整合胶质细胞的活动。近年来的研究还发现缝隙连接在癫痫形成和发展过程中发挥着十分重要的作用。连接蛋白32(eonnexin32Cx32)、连接蛋白43(connexin43Cx43)是组成中枢神经系统神经元和星形胶质细胞之间缝隙连接的主要蛋白。CX32、CX43与癫痫的关系也备受国内外学者关注。甘珀酸为非选择性缝隙连接

3、阻断剂，能通过衍生物直接与缝隙连接结合，使之构象发生变化，从而导致通道关闭。目的本研究在建立锂．匹罗卡品癫痫幼鼠模型的基础上，探讨CX32和CX43与癫痫的关系及其在癫痫形成中的作用，缝隙连接阻断剂甘珀酸可能具有潜在的抗癫痫作用。材料与方法1分组：21日龄健康SD大蜃t120只，雌雄不限，体重(65．70)g，随机分成为对照组(n叫O)、模型组(n叫O)、干预组(n-：40)。摘要2行为学观察：各组大鼠在药物处理后，立即进行观察，每天至少5个小时；凡连续出现3次Ⅳ级以上发作，为完全点燃。病性发作强度

4、参考Racine6级(0．V)评定法。3标本采集与制备：每组分别于244,时、3天、7天、30天经各取10只经乙醚麻醉后，剪开胸腔，暴露心脏，剪开右心耳，以20ml注射器连接5号头皮针经左心室灌注9班盐水和409／L多聚甲醛，直至右心耳流出澄清液体、肝脏发白、躯干变硬为止。断头取脑，做冠状切片，进行苏木素．伊红(HE)染色及连接蛋白CX32和CX43免疫组化检测。4指标测定1)由于锂一匹罗卡品癫痫动物模型特点，行为学观察分三个阶段进行：急性期：重型发作的次数，潜伏期长度；静止期：静止期的长度；自发性

5、反复发作期(spontaneousrecurrentseizuresSRSs)：自发性反复发作的次数；2)HE染色：常规HE染色，光学显微镜下观察脑组织病理改变。3)胞核染成棕黄色者判为CX32、CX43阳性表达产物，然后用彩色病理图像分析系统测量切片海马CAl区CX32、CX43吸光度值(OD)，每张切片取5个视野测量取其平均值，同时测量同一张切片胼胝体的OD值以作为背景OD值，用矫正吸光度值COD(实测值一背景值)进行比较和分析，以避免染色过程中非特异性染色所造成的误差。5统计学分析：各组数据采

6、用均数±标准差(i±s)表示，以a--0．05为检验水准。应用SPSSl3．0统计学软件进行处理，两两比较采用t检验，成组数据的比较采用单因素方差分析。仕甲三日木1行为学评估结果：模型组大鼠急性期重型发作(RaeinelV．V级)次数较干预组明显增高护

7、点大鼠海马区CX32表达较同一时间点对照组明显增高(尸

8、发展过程中可能具有重要的意义。2缝隙连接阻断剂甘珀酸可能具有一定的抗癫痫作用。关键词：癫痫缝隙连接连接蛋白32连接蛋白43甘珀酸IIIAbstractEpilepsy,causedbyavarietyofcauses，isacomplexeliniealsyndrome．Epilepsyisachronicdiseasecharacterizedbyrecurrentepisodicandcentralsystemdysfunctioncausedbyabnormal