吡咯喹啉醌对γ辐照细胞与动物模型辐射防护作用机制的初步研究论文

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1、毗略喹啉醌对Y辐照细胞及动物模型辐射防护作用机制的初步研究中文摘要现实环境中人们受到放射线辐射的机会非常多，从食品辐照、医用射线到空间电离辐射，辐射无处不在。大剂量辐射可引起机体多种组织和器官的损伤，甚至诱发细胞突变、癌变、致死等严重后果。辐射产生大量自由基，导致机体氧化应激是辐射损害的主要作用机理之一。吡咯喹啉醌(pyrroloquinolineqmnone，PQQ)是一种氧化还原酶的辅基，作为电子的供体和受体参与氧化还原过程。大量研究表明PQQ有很强的清除自由基能力。Hari等构建的PQQ基因工程菌有较强的清除自由基能力，上调过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活力，显

2、示出极强的耐辐射能力。本实验室初步研究显示PQQ对高能电子射线照射引起的大鼠皮肤损伤有一定的防护作用。本研究拟从抗氧化损伤角度出发，研究PQQ对60CoY射线照射细胞的辐射效应的影响；同时建立60CoY射线照射小鼠损伤模型，进一步探讨PQQ对辐射损伤动物的防护作用。’一、PQO(吡咯喹啉醌)对"CoY射线照射胃癌细胞株AGS细胞抗氧化能力的影响目的：通过检测PQQ对60CoY射线照射AGS细胞的生长增殖，细胞抗氧化水平及自由基含量变化，研究PQQ对辐射细胞的防护作用机制。方法：将AGS细胞培养在含10％胎牛血清的RPMll640培养液中，置于37℃、5％C02培养

3、箱，保持饱和湿度，环境温度为25℃。取对数生长期的细胞，经台盼蓝染色，活细胞超过80％者用于实验。实验分四组：正常未照射组、单纯照射组、PQQ处理未照射组、PQQ处理照射组。于照射前4h加入PQQ，PQQ在培养液中的终浓度为lO“mol／L。室温条件下，照射组细胞用60CoY射线照射，照射剂量8Gy，剂量率1Gy／min，单次照射。各组于辐照后6h、24h、48h、72h进行MTT测定，绘制照射后各组细胞的生长曲线；分别于辐照后6h、12h、24h，收集、裂解细胞，制备细胞匀浆，检测细胞T-AOC、SOD及MDA含量。结果：①正常未照射组AGS细胞生长曲线呈倒“Z

4、”状，在24h．48h细胞呈指数增长；其余各组均出现细胞增殖抑制，其抑制程度依次是：单纯照射组

5、抗氧化水平降低，自由基含量升高，导致细胞的氧化应激。PQQ一方面能直接清除自由基，调节其它抗氧化酶系的活性，保护细胞免受自由基攻击；另一方面通过抑制受照后AGS细胞增殖，有利于遗传物质的损伤修复。同时PQQ也能抑制正常生长的AGS细胞的增殖。二、P00(吡咯喹啉醌)对y射线照射小鼠辐射防护作用的初步研究目的：建立COCoy射线损伤小鼠模型，经口灌服PQQ，检测小鼠血清抗氧化水平及肝组织损伤程度，初步研究PQQ对Y辐射小鼠的防护作用方法：8周龄的昆明小鼠，雌雄各半。适应性喂养1周后。小鼠随机分未照射组和照射组，其中照射组分低剂量照射组(SGy)和高剂量照射组(10G

6、y)。各照射剂量组再分成三组：照射前给药组、照射后给药组、照射未给药组，每组10只。给药组小鼠经口灌服PQQ，口服剂量按体重计2mg／kg／d。照射前给药组小鼠于照射前连续给药7天。至第8天，按分组要求进行60CoY射线单次照射。照射后给药组小鼠于照射后连续给药7天。于照射后第8天，颈椎脱臼处死小鼠，收集血液及肝，制备血清及肝匀浆，．20"C保存，进行各项指标测定。同时，制作肝切片，HE染色观察其结构。结果：所有10Gy剂量照射组小鼠，于照射后8天全部死亡，照射前口服PQQ组平均存活7天，照射后口服PQQ组平均存活6．2天，单纯照射组平均存活5．3天。5Gy剂量照

7、射未给药组小鼠，血清及肝脏中SOD、T-AOC显著下降，MDA显著升高；肝板排列紊乱，有明显的肝细胞水肿现象。而照射组给药组小鼠，血清SOD、T-AOC含量显著升高，基本达到正常未照组水平，自由基含量虽高于正常未照组，但显著低于单纯照射组；肝脏中SOD含量升高显著。从小鼠肝组织HE染色切片看：所有照射组小鼠肝组织都有肝板排列紊乱，窦周隙缩小或消失，局部出现肝细胞水肿，变性、坏死现象，照射前及照射后给药组肝损伤程度比照射未给药组稍严重。结论：Y辐射引发小鼠全身性的氧化应激，肝脏是重要的辐射敏感器官。本研究显示：PQQ对Y辐射小鼠引起的全身氧化应激有一定的防护作用，P

8、QQ也能在