褪黑素对大鼠重症急性胰腺炎肾脏损伤的保护作用与机制研究

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5、JJ¨Y178466腺炎肾脏损伤的保护作用及机制研究摘要目的：观察重症急性胰腺炎大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)，肾脏组织Livin蛋白和Caspase．9表达的变化，以探讨褪黑素对重症急性胰腺炎(SAP)相关肾脏损伤的保护作用及相关机制。方法：雌性SD大鼠90只，随机分为正常对照组(NC组)(12H、24H、48H组分别各lO只)，模型组(SAP绀1)(12H、24H、48H组分别各lO只)，褪黑素组(MT组)(12H、24H、48H组分别各10只)。大鼠术前12H禁食，自由饮水。3％的戊巴比妥钠

6、按40mg／妇的剂量经腹腔注射麻醉。常规消毒，铺巾，在无菌操作下做上腹正中切口3cm左右，打开腹腔，找到胃十二指肠交界处，再向下寻找到胰胆管十二指肠开口处。用丝线结扎(活结)近肝门处胰胆管，用4．5号头皮针于十二指肠乳头附近经十二指肠肠壁穿刺，逆行插入胰胆管，并在十二指肠乳头处用手指捏住胰管末端。按lml／kg将5％牛磺胆酸钠逆行匀速推注至胰管中(O．2ml／min)，使整个胰胆管均匀隆起。退出针头，即用手压迫进针处约3～5min，然后去除结扎线，关腹，并同时开始计时观察。正常对照组开腹后翻动肠壁即关腹。褪黑素组在术后10分钟用褪黑素溶液于大鼠背部皮下注射3ml。褪黑素

7、按照文献数据选取大剂量(50mg／l(g)。MT先被无水乙醇溶解，再用生理盐水稀释，使乙醇的终浓度为l％。模型组大鼠采用同样方法给予等量的1％乙醇溶液。用全自动生化分析仪测定大鼠血清淀粉酶，肌酐(Cr)，尿素氮(BUN)；用硫代巴比妥法测定MDA含量，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力；免疫组化法检测肾组织Livin和Caspase．9的表达；原位末端标记法(TI帆L)检测肾脏细胞凋亡率。结果：1．胰腺的病理改变：正常对照组大鼠胰腺组织大体所见未见明显病变。SAP造模组大鼠胰胆管逆行注入5％牛磺胆酸钠后，胰管周围胰腺组织颜色立即变红，并逐渐扩展、加深。SAP造模12H后再次剖

8、腹发现胰腺颜色紫暗，充血水肿明显，可见局部坏死及出血，腹水明显，呈淡红色。褪黑素组大鼠12H后剖腹见胰腺颜色变暗，充血水肿，但较模型组程度轻，未见明显坏死、出血，有少量腹水。SAP造模24H后，剖腹可见腹腔内大量淡红色腹水，胰腺与周围脏器粘连严重，表面可见多处出血点及坏死灶。褪黑素24H干预组剖腹观察，大鼠腹腔内可见腹水，胰腺与周围组织轻度粘连，胰腺水肿，色泽紫暗，胰腺及网膜组织多处皂化斑。SAP造模48H后，剖腹可见腹腔内大量血性腹水，胰腺与周围脏器粘连严重，表面可见多处出血点、坏死灶及皂化斑。褪黑素48H干预组剖腹观察，大鼠腹腔内可见腹水，肠管淤胀，胰腺与周围组织轻

9、度粘连，胰腺水肿，色泽紫暗，胰腺及网膜组织多处皂化斑。光镜下观察：正常组胰腺组织结构完整，间质无炎细胞浸润。SAP模型12H组可见胰腺叶间隔、小叶间隙、腺泡间隔增宽及少量炎细胞浸润；褪黑素12H干预组胰腺小叶间隙增宽、少量炎细胞浸润，较胰腺炎组程度轻。SAP模型24H组时胰腺损伤较显著，胰腺腺泡肿胀、出血、小叶内和小叶外周局灶或片状坏死，间质可见较大量炎细胞浸润、部分腺叶正常结构消失。褪黑素24H干预组胰腺间质疏松水肿，小叶小片状坏死，间质有炎细胞浸润，小叶结构相对清晰。SAP模型48H组时胰腺损伤已经十分显著，表现为胰腺腺泡极度肿胀、出血、小叶内和小叶外周局灶或片状坏

10、死，间质可见大量炎细胞浸润、部分腺叶正常结构消失。褪黑素48H干预组胰腺间质疏松水肿，可见红细胞渗出、小叶小片状坏死，间质有炎细胞浸润，小叶结构相对清晰。2．肾脏组织病理改变：正常对照组大鼠肾脏组织大体所见未见明显病变。SAP模型组12H时肾脏外观轻度水肿，呈暗紫色；24H时肾脏充血水肿加重，并可见少量出血点。48H时肾脏充血水肿严重，并可见大量出血点。褪黑素干预组各时间点肾脏病理改变均较SAP组减轻。光镜观察结果：正常对照组未见异常。各时点肾皮质、髓质结构清晰，肾小管、肾小球结构正常。SAP组12H时肾小球轻度肿胀，肾小管肿胀较为明显，肾间质见炎细胞浸润；24H时肾小

11、球、肾小管肿胀加重，肾小管上皮细胞可见驴死，肾间质炎细胞增多。48H时肾小球、肾小管肿胀严重，肾小球可见淤血，肾小管上皮细胞可见坏死，肾间质大量炎细胞，可见管型。褪黑素干预组各时间点光镜下所见病理改变均较SAP组减轻。3．生化指标：SAP造模组各时间点的血清AMY、Cr、BUN及MDA含量较正常组各相应时间点显著升高(P<0．01)；SAP造模组各时间点的SOD活性较正常组各相应时间点显著降低(P<0．01)。与SAP造模组比较，褪黑素干预组各时间点的血清AMY、Cr、BUN及MDA含量显著降低(P