丙烯腈对雄性精子质量的影响及genistein结抗丙烯腈致睾丸leyding细胞毒性的实验研究

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1、丙烯腈对雄性精子质量的影响及genistein拮抗丙烯腈致睾丸Leydig细胞毒性的实验研究摘要第一部分丙烯腈对男性接触人群精子质量的影响目的探讨丙烯腈(AN)对男性接触人群精子质量及血清激素水平的影响。材料与方法采集94例男性精液标本，其中健康志愿者27例作为对照组，丙烯腈接触工人67例作为接触组，采用计算机辅助精子分析技术(CASA)分析其精子质量。改良巴氏染色观察精子畸形率。采用电化学发光免疫法检测血清中促甲状腺激素(TSH)，卵泡刺激素(FSH)，黄体生成素(LH)，雌激素(E：)及睾酮(T)的水平

2、。单细胞凝胶电泳法检测精子DNA完整性。结果丙烯腈接触组男性的精子密度、运动精子密度、前向运动精子密度、精子运动速度(VAP)、精子前向运动速度(VSL)以及直线性(LIN)和摆动性(woB)均较对照组降低，精子畸形率及液化时间较对照组升高。丙烯腈接触大于15年的男性工人的运动精子密度、前向运动精子密度、精子运动速度、精子前向运动速度、直线性及摆动性低于丙烯腈接触小于等于15年的男性和对照组男性。接触组和对照组的促甲状腺激素、黄体生成素、卵泡刺激素无明显差异，接触组雌激素水平高于对照组，差异有统计学意义，而

3、睾酮虽然低于对照组，但无统计学意义。接触组精子细胞的尾长、尾部DNA含量、Olire尾矩均大于对照组，但仅尾部DNA含量与对照组相比有统计学意义。结论丙烯腈接触能导致精子质量特别是精子运动参数的降低及性激素水平的紊乱。应用计算机辅助精子分析技术能够客观、准确地评估丙烯腈接触对男性精子的影响。第二部分丙烯腈致睾丸毒性的实验研究目的探讨丙烯腈(AN)对大鼠精子质量的影响及其致睾丸毒性的分子机制。材料与方法采用含不同浓度AN的蒸馏水对SD大鼠进行灌胃，浓度分别为0，5，10，20mg／kg／d，共10周。每周测量

4、大鼠体重。10周后，处死大鼠，获取大鼠睾丸、附睾，行组织病理学检查。电镜观察睾丸超微结构变化。采用计算机辅助精子分析技术检测大鼠附睾精子质量。通过检测大鼠睾丸还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的酶活性，评估睾丸的氧化应激情况。酶联免疫法检测大鼠血清睾酮水平。免疫组织化学检测睾丸组织中Fas、FasL的表达。RT—PCR和Western-Blot检测睾丸组织Fas，FasL和3p羟基类固醇脱氢酶(3p—HSD)mRNA和蛋白质表达水平。

5、结果随着AN2灌注浓度的升高，大鼠体重呈下降趋势，但睾丸附睾重量无明显变化。实验组大鼠的附睾精子活率、精子前向活动率、VAP、VSL、LIN明显降低，并呈剂量依赖关系。电镜下发现实验组大鼠睾丸的组织病理学改变主要为以支持细胞空泡化及Leydig细胞凋亡为特征。免疫组织化学检测发现Fas表达于睾丸间质Leydig细胞、FasL表达于睾丸支持细胞(Sertoli)和间质细胞(Leydig)，且随着AN灌注浓度的升高，Fas／FasL表达呈增高趋势。实验组大鼠睾丸GSH含量显著降低，而MDA含量显著升高。实验组大

6、鼠睾丸Fas和FasLmRNA和蛋白质表达水平显著升高，而3[I-HSD表达水平显著降低。结论丙烯腈接触对大鼠精子运动能力有抑制作用。氧化应激损伤在丙烯腈所致的睾丸毒性中起重要作用，其机制可能涉及Fas／FasL系统的参与及睾丸Leydig细胞的凋亡。第三部分抗氧化剂genistein对丙烯腈致大鼠Leydig细胞毒性的拮抗效应目的探讨抗氧化剂genistein对丙烯腈(AN)致大鼠Leydig细胞毒性的拮抗效应。材料与方法采用酶消化法结合Percoll非连续密度梯度法分离纯化大鼠睾丸Leydig细胞，并行

7、3p—HSD特异性免疫荧光染色鉴定。CCK8法检测不同浓度AN对Leydig细胞的毒性作用。RT—PCR和Westernblot检测AN对Leydig细胞Fas／FasL表达的影响。流式细胞术分析AN以及抗氧化剂genistein对Leydig细胞凋亡的影响。测定genistein对AN处理的Leydig细胞MDA及GSH含量的影响，并检测genistein对AN处理的Leydig细胞NFlcB核蛋白表达的影响。结果酶消化法结合Percoll非连续密度梯度法能获得较高纯度的大鼠Leydig细胞。AN对睾丸L

8、eydig细胞的细胞毒性具有时间剂量依赖关系。流式细胞术检测发现Leydig细胞凋亡显著增加。AN处理的Leydig细胞Fas、FasL表达明显升高，MDA含量增加，GSH含量减少。AN和genistein共处理的Leydig细胞凋亡明显减少，MDA含量降低，GSH含量升高，NF一诎p65蛋白表达增高。结论丙烯腈能通过诱导大鼠Leydig细胞氧化应激和Fas／FasL表达而促进细胞凋亡。抗氧化剂genistein