mir-22在内皮祖细胞衰老中的作用及机制研究

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1、万方数据上海交通大学医学院博士学位论文Titie：Author：SHANGHAIJIAoToNGUNIVERSITYDOCToRALDISSERTATIONMicroRNA一22InducesEndothelialProgenitorCellSenescencebyTargetingAKT3ZhengYueStudentID：012731936lMentor：Major：Researchfield：Applyfor：Author’SA116iIiation：HongchangLaiPediaricsResearchonthemech

2、nismofMicroRNA．22InducesEndothelialProgenitorCellSenescenceDoctordegreeofPhilosophyShanghaiChildren’SMedicalCenter,Schoolofmedicine，ShanghaiJiaotongUniversityDateofthesisdefence：April．24也，2015Keywords：EPCs；miR一22；senescence；proliferation；migration；angiogenesis；Akt3Apri

3、l2015万方数据上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并商匡家有关部门或机构送交论文豹复印件和电子舨，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫接等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在』解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密留。(请在以上方框内打群4挣)学位论文作者签名：彳予∞指导教师签名：一坞彤1日瓤泌，年。月，妒日万方数据上海交通大学学位论文原刨性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文

4、，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明弓l用的内容外，本论文不包含任何其他个入或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名；么争鼬日期：哆驴ff年,．t-71I丫日万方数据背景及目的摘要内皮祖细胞(Endothelialprogenitorcells，EPCs)是血管内皮细胞的前体细胞，广泛存在于脐带血、外周血及骨髓中，参与缺血性疾病血管新生和损伤后的血管内皮的愈合修复。当血管受到损伤后，EP

5、Cs从骨髓中释放进入外周血中，迁移至损伤部位，然后增殖分化为成熟内皮细胞，促进损伤血管再内皮化。已有的大量研究表明，随着年龄的增长，EPCs数量减少，其粘附、增殖、迁移和血管形成等功能也随之衰退。这一结论表明年龄的增长使EPCs呈现细胞衰老表型，但其确切的作用机制仍不清楚。MicroRNAs(miRNAs)是一类长度约为22个核苷酸左右的单链内源性非编码小RNA，广泛存在于动物及植物中。mlRNAs脏～够通过与其靶基因的3’端非编码区(37untranslatedregion，UTR)进行完全或不完全互补配对的方式直接降解其靶基因或

6、者对其靶基因进行转录后调控，从而参与细胞存活、衰老、增殖、分化、迁移等重要的细胞生理过程。miRNAs的异常表达与多种疾病如心血管疾病等密切有关，而心血管疾病与EPCs又有着密切的关系。近年来，EPCs的衰老与miRNAs的关系受到人们的重点关注，女NZhao及其同事报道miR一34a通过抑制沉默信息调控子1(Sirtl)的表达，加速EPCs的衰老，并降低细胞血管形成能力。Zhu课题组研究发现miR．10a和miR．21通过靶Ifi-JHmga2来调节小鼠EPCs的衰老、迁移、增殖、自我更新和体内外血管形成能力；该研究的芯片结果也显

7、示miR一22在小鼠老年组中表达量要高于小鼠年轻组。那么，miR一22在人老年组中是否也是高表达?miR．22是否在EPCs衰老过程中发挥生物学作用呢?为了解决这些问题，我们首先设置了年轻组(21岁左右)和老年组(66岁左右)两组样本，分离出EPCs，然后采用多种研究方法来研究miR一22对EPCs的细胞衰老、增殖、迁移和血管形成的影响。通过预测软件的预测和生物信息学分析，推测Akt3可能是miR-22的潜在靶基因，最后采用各种实验方法探讨Akt3与miR一22之间的关系，从而来阐明miR一22对EPCs衰老的作用机制。万方数据方法

8、(1)本研究设置两组样本，一组是年轻组(21岁左右)，一组是(66岁左右)，每组各3个样本，采取其外周血，然后采用密度梯度离心法(淋巴分离液FicoU)来分离外周血，获得单个核细胞，最后运用贴壁分离法获得较纯的EPCs。(2)采用Di