rpr、elisa和pcr三种梅毒检测方法在献血筛检中的应用效果评价

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1、四川大学硕士研究生学位论文声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师丁显平教授指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。．本学位论文成果是本人在四川大学读书期间在导师指导下取得的，论文成果归四川I大学所有，特此声明。导师签名：研究生签名：砷尹}舒四川大学硕士研究生学位论文RPR、ELlsA和PCR三种梅毒检测方法在献血筛检中的应用效果评价硕士研究生

2、：李文导师：丁显平教授四川大学生命科学学院遗传医学研究所摘要梅毒(syphilis)是危害人类健康较为严重的一种性传播疾病，近年来，我国的梅毒发病率呈逐渐上升趋势。梅毒的病原体属于密螺旋体属苍白螺旋体(Treponemapallidum，TP)的苍白亚种，又称梅毒螺旋体。人是梅毒的唯一传染源。梅毒有先天性和获得性两种。先天性梅毒(又称胎传梅毒)是梅毒螺旋体通过胎盘传染胎儿，早期可致胎儿流产、早产，晚期感染的成活胎儿可能患先天梅毒。获得性梅毒主要经性接触传播，接吻、手术、哺乳、输血、接触污染物也可被传染。获得性梅毒在临床上分为三期：一期梅毒、二期梅毒和三期梅毒。人体感染梅

3、毒螺旋体后，可产生特异性抗梅毒螺旋体抗体和非特异性抗心磷脂(cardiolipin)抗体。特异性抗梅毒螺旋体主要有IgM、IgG抗体，IgM抗体持续时间短，IgG抗体却持续时间长，甚至可终生存在，但抗体浓度较低，一般不能预防再感染。非特异性抗心磷脂抗体又称反应素，是由梅毒螺旋体破坏的组织细胞所释放的类脂样物质以及梅毒螺旋体自身的类脂和脂蛋白刺激机体产生的IgM和IgG抗体。这种抗体也可在非梅毒螺旋体感染的多种急、慢性疾病患者的血清中检出。特异性抗梅毒螺旋体抗体比非特异性抗心磷脂抗体出现得早，即使经过正规抗梅毒治疗，抗梅毒螺旋体抗体仍持续存在，甚至可终生存在。对梅毒进行早

4、诊断、早治疗对于控制其蔓延至关重要。而选择敏感性高、特异性强的梅毒实验室检测方法将十分有助于梅毒的诊断。目前，梅毒检测的常用方法主要有：快速血浆反应素试验(rapidplasmareagincirclecardtest，RPR)、甲苯胺红快速反四川大学硕士研究生学位论文应素试验(toluidineredunheated-serumtest，TRUST)、梅毒螺旋体ELISA试验(enzyme1inkedimmunosorbentassay，ELISA)、梅毒螺旋体血凝试验(treponemapallidumhemagglutinationassay，TPHA)和梅毒螺旋

5、体颗粒凝集试验(treponemapallidumparticleagglutination，TPPA)等，有时也用到免疫印迹法和PCR(Polymerasechainreaction，PCR)方法。我国的国家标准规定，献血者梅毒试验必须阴性，使用的梅毒检测方法可以是RPR法、TRUST法或ELISA法。因此，在献血筛检中，选择使用敏感而特异的梅毒检测方法，对于提高血液质量、防止经输血传播梅毒、保证输血安全具有十分重要的现实意义。本实验拟在献血筛检中建立起梅毒的RPR半自动检测方法、ELISA全自动检测方法、TPPA和荧光定量PCR的手工检测方法；用这四种方法对献血者血

6、液标本进行梅毒检测；分析检测结果，评价检测方法，选择最适合血站进行大规模血液筛检的梅毒检测方法。材料与方法1、研究对象：本实验收集成都市血液中心2006年lO月上旬至2007年2月上旬采集的，在国家标准规定的健康征询和健康检查中均合格的自愿无偿献血者血液标本32327份，用EDTA抗凝。梅毒抗体室内质控品用作室内质控。2、实验方法：利用ATplus2全自动加样器及其SUNRISEplus用户软件、FAME24／20全自动酶联免疫分析仪及其用户软件、itswell血液检验质量控制与管理软件，建立了ELISA全自动检测方法。利用TECANRSP150全自动加样器建立了RPR

7、自动加样方法，利用KJ一201BD型振荡器建立了RPR手工检测方法。利用Heidolph微板振荡器、背光式读片灯等建立了TPPA检测方法。利用FTC-2000型荧光定量PCR仪建立了荧光定量PCR检测方法。同时使用RPR法和ELISA法，对32327份献血者血液标本作了梅毒检测，对任意一种方法检测出的阳性标本，再使用TPPA法和荧光定量PCR法进行检测。分析检测结果，评价检测方法。统计方法：x2检验。实验结果1、RPR、ELISA、TPPA和荧光定量PCR四种梅毒检测方法的建立成功建立了自动加样、自动检测的梅毒ELISA检测方法，自动加样