初生乌骨鸡肝脏差异显示ests的筛选与分析

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1、初生乌骨鸡肝脏差异显示ESTs的筛选与分析中文摘要乌骨鸡是我国独特的家禽品种，是分布广泛的古老鸡种之一．丝羽乌骨鸡以其独特的外貌特征和药用、营养及观赏价值为中外家禽育种工作者所重视。家禽品种问和个体间的性状差异本质上郝是由于基因种类的差异和基因表达量的差异所致．对同一个体不同组织或不同品种的相同组织的基因表达差异进行比较研究，可获得与生命过程相关的信息，揭示不同性状的发生发展机理．同时为研究乌骨鸡独特性状的形成机理提供重要的信息，并为进一步研究和开发利用乌骨鸡这一独特地方品种打下基础。本试验分别以IEl龄丝羽乌骨鸡(SK)．常羽乌骨鸡

2、(IWP)、苏禽蛋鸡(SQ)、爱拔益加内鸡(从)肝脏为研究材料，期望在排除饲养条件等环境因素对基因表达的影响下，比较初生蛋鸡、肉鸡和乌骨鸡基因表达上的差异。本试验采用26碱基的三个锚定引物与24个随机引物之间共72个组合的逆转录PCP,反应对i日龄丝羽乌骨鸡、常羽乌骨鸡、苏禽96型蛋鸡、从肉鸡肝脏总RNA进行DDRT-PCR分析，并利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染技术分离DDRT—PCR产物，共获得四个品种间差异条带251条。经过PCR再扩增、电泳检测和纯化，共得到差异显示的cDNA片段220条(重扩增率为87．6％)。经SSCP

3、检测获得198个重扩增产物表现为单一eDNA的带型，单一条带率为90％。经过基因芯片杂交扫描，比较综合扫描数据获得8个真实的差异表达cDNA片段，委托上海生物工程公司克隆测序，获得4个ESTs序列．4个差异显示ESTs较短，且经1％琼脂糖电泳捡测显示这些奈带比非差异显示条带弱，推测差异表达的基因表达丰度低。四个差异显示ESTs去除质粒污染序列后向Geabank提交，获得登陆号D000327卜DQ003274．经与鸡基因组比对，分别进行了定位．具体定位是DQ00327i：5号染色体；DQ003272：3号染色体；DQ003273：线粒体

4、：bQ0032"／4：19号染色体。其中DQ003271为家鸡新的EST，推测其功能与包含卷曲螺旋结构的蛋白的表达有关。其余3个为家鸡已知表达序列标签，其中DQ003272在机体免疫功能上发挥作用，DQ003273可能影响细胞有氧呼吸和氧化还原代谢，DQ003274可能与控制细胞分化和发育有关．肝脏是“物质代谢中枢”，其表达的基因及合成的蛋白质种类占生物体内所有基固和蛋白质的绝大多数．筛选获得的表达序列标签从几个功能侧面反应了肝脏功能的多样性和重要性。本试验结果为进一步研究乌骨鸡、蛋鸡、肉鸡之间的差异性状和鸟骨鸡的独特性状提供了重要信

5、息。但各差异表达序列标签及其所代表的基因尚需在结构、功能、性状差异与基因表达差异的联系方面做进一步的试验和分析工作．关键词：丝羽乌骨鸡；肝脏；差异显示PCR；表达序列标签；生物信息学ScreeningAndPrimarilyCharacterizingESTsDifferentialDisplayedinnew-bornBlack-BoneChicken’sLiverAbstractBlack—bonechickenisonekindofuniquedomesticchickenbreedsandwidelyspreadsinChin

6、a，OwingtotheSilkies’uniquetraits，highofficinal，viewingandnutritiousvalues，scientistsputhighpremiumonitsbreedingandexploitationforalongtime．Theessencesofvariationsamongbreeds’traitsorindividuals’traitsaresubjecttothedifferentkindofexpressinggenesorthesamegenebutindiffere

7、ntlyexpressingamount．Researchondiscrepancyingeneorgene’sexpressingamountisausefulwaytoobtaintheinfotraationoflifeanduncovertraits’occurrenceanddevelopment，Furthermoreitcanalsoprovideimportantinformationofwhichhowtheuniquetraitsofblack·bonecomeintobeingandformthebaseofad

8、vancedresearchofblack—bonechicken．Excludinginterferenceofbreedingconditions’distinctness，thistrialcomparedthed