琥珀酸产生菌的分离鉴定、诱变选育与发酵条件优化

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1、琥珀酸产生菌的分离鉴定、诱变选育及发酵条件优化摘要细菌发酵生产琥珀酸成本低廉、对环境污染少。由于其生产原料可再生，并能吸收利用温室气体C02，使之成为近年来国内外生物质能源转化的研究热点。+本研究通过采用选择性较强的富集培养和快速准确筛选程序，从牛瘤胃中分离出适于淀粉质原料的琥珀酸产生菌，并进行相关的生理生化鉴定；通过紫外照射诱变育种得到琥珀酸高产突变株，优化培养基组成并确定最适发酵培养条件。主要研究结论如下：1．在富集培养中添加莫能菌素和富马酸钠，经溴甲酚绿变色平板快速检出500株产酸菌株。菌株发酵后经TLC初筛和改进后的HPCE方法复筛检测，得到6株优良产

2、酸菌株，其中B-15菌株产琥珀酸11．5g．L～，副产物甲酸4．659·L．1，乙酸6．25g·L～，该菌株琥珀酸产量最高。菌株B．15经生理生化鉴定后，初步确定其为放线孝T菌属(Actinobac趔凇sp．)。2．以B．15为出发菌株，通过紫外照射诱变，依次采用溴甲酚绿平板、氟乙酸平板和丙烯醇平板对菌株进行定向选育，得到的突变株FB．4发酵产琥珀酸19．909‘L-】，副产物乙醇7．55g·L-J，甲酸2．05g'L一，乙酸4．85g·L一，其琥珀酸产量较原始菌株提高70％。3．对突变株FB一4进行发酵试验的结果表明，最佳发酵培养基组成为，葡萄糖509'L一

3、，酵母提取物109·L．1，玉米浆5g-L～，K2HP043g-L～，MgCl2·6H200．4g'L～，CaCl20．3g·L一，NaCl0．5g'L～，MgC0315g．L一，复合氮源对菌株发酵影响较大；摇瓶最适发酵培养条件为，温度37"C，接种量5％，转速100r．min～，厌氧发酵气室控制条件为，40％C02，5％I-12。在上述条件下初始pH7．0，发酵48h，琥珀酸产量达24g·U1。关键词：琥珀酸菌株分离鉴定诱变育种发酵Isolation，Identification，MutationBreedingandFermentationConditio

4、nOptimizationofaStrainforProducingSuccinicacidABSTRACTTherearesomeadvantagesinsuccinicacidfermentationbybacteria，suchaslowprocessingCOStandlittlepollutionforenvironment．BecauseofusingrenewableagricultureresourcesandgreenhousegasC02，theresearchforsuccinicacidfermentationhasbecometheh

5、otspotofbioconversionresearchathomeandabroadinlastyears．Inhighselectivityenrichmentculturingprocessandrapidscreeningprocedure．thesuecinicacidproducerswimstarchnessandsaccharidewereisolatedfrombovinerumen．Aftertherelatedphysiologicalandbiochemicalreactionidentification，theparentstrai

6、nwasirradiatedbyUV．Duringsomescreeningplatesthemutantslrainswereobtainedwithhi【曲yieldofsuccinieacid．Andthen,theculturemediumingredientandfermentationconditionwereoptimized．Themainresultswereasfollowing：1．Themonensinandfumaratesodiumwereaddedinenrichmentcultureforselectiveculturingmo

7、stofbacteria，whichwouldproducesuccinicacidfrombovineruminalcontents．Fivehundredstrainsproducingorganicacidwereisolatedwithyellowhoopasselectivemarkpresentedinthebromocresolgreenmedium．AftersimplefermentationsixstainswithhighyieldwereselectedbyTLCpreliminaryscreeningandtheimprovedHPC

8、Esecondaryscreening