利用孕妇外周血中胎儿有核红细胞无创性产前诊断染色体非整倍体异常

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1、1雌卜学位沦殳利用孕妇外周血中胎儿有核红细胞无创性产前诊断染色体非整倍体异常华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科博士研究生张铭导师陈汉平教授中文摘要第一部分利用胎儿血红蛋白表型显微操作分选母血中胎儿有核红细胞[摘要]目的建立高纯度、高特异性的细胞分选技术，富集纯化母血中胎儿有核红细胞(fetalnucleatedredbloodcells，FNRBC)并探索最佳分选时机。方法188例孕妇外周血，经密度梯度离心初步富集后行血红蛋白Y链(gammachainofheamoglobin，Y—Hb)免疫组化染色，以显微操作技术挑取阳性细胞。采用单细胞引物

2、延伸预扩增(primerextensionpreamplification，PEP)及聚合酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)技术检测Y染色体特异性片段SRY基因。结果月ffJL有核红细胞具有鲜明的形态学、免疫学特征。188例母血中每例检测0．6×108个有核细胞，186例可检出FNRBC，数目为5～89个。正常妊娠孕妇共160例，早、中、晚孕FNRBC的数目分别为10．44±3．19，29．96±4．10，22．oo±3．55，三组之间具有极显著差异(P

3、eStriction，FGR)妊娠18例，母血中FNRBC数均显著高于同孕期『F常妊娠组(P

4、JL红蛋白Y链为分选标志，结合显微操作技术，可以有效获取高纯度、高浓度研究模板，为后继准

5、确、特异的细胞来源鉴定及基因分析奠定錾础。中弓qlEl母㈣fII：NRBC数目最高，胎儿染色体非整倍体异常妊娠FNRBC升高，可为进一步的无创性产前诊断提供依据和指导。[关键词]胎儿血红蛋白显微操作分离单细胞基因分析产前诊断第二部分应用短串联重复序列鉴定母血中胎儿有核红细胞[摘要]目的探索x染色体短串联重复序列(shorttandemrepeats，STR)位点在无创性产前诊断中用于胎儿细胞鉴定、性别判断等的可行性。方法47对孕妇及其配偶外周血，以血红蛋白y链染色结合显微操作分离获取母血中胎儿有核红细胞，经PEP扩增细胞基因组后，对2个x染色体STR

6、位点DXSl01、DXS6797及AMXY(XandYamelogeninalleles)基因进行PCR扩增。同时对各对夫妻外周血DNA进行上述基因位点扩增，聚丙烯酰胺及琼脂糖电泳后胎儿样本及其双亲的基因型对比分析判断胎儿性别及NRBC来源。结果3例扩增失败，其他44例联用DXSlol、DXS6797及AMXY基因诊断女胎、男胎的灵敏度分别为90％(18／20)、91．67％(22／24)，胎儿性别诊断符合率为90．91％(40／44)。结论采用多个X-STR位点及AMXY基因扩增作为母血中胎源细胞鉴定系统，不局限于男胎，可准确鉴定细胞来源并判断胎儿

7、性别，而且快速、价廉，具有广阔的发展前景。一，[关键词]短串联重复序列；胎儿有核红细胞：无创性；产前谚断#中f}技人学ItiJi弃f，、’学院第三部分利用母血中胎儿有核红细胞产前诊断染色体非整倍体异常试验一母血中胎儿有核红细胞荧光原位杂交诊断染色体非整倍体异常[摘要]目的探讨利用孕妇外周血中胎儿有核红细胞进行染色体非整倍体异常的产前诊断的可行性。方法根据B型超声及孕中期AFP、uE3、B—HCG三联血清学检测，从进行遗传咨询的114例孕妇中筛选出高危孕妇，另有1例产妇，因新生儿为Down综合征(Downsyndrome，DS)儿于产后6天采集母血。以

8、血红蛋白Y链染色结合显微操作分离获取母血中胎儿有核红细胞，采用CEPx／Y及LSI21探针对孕产妇血样中的胎儿FNRBC进行荧光原位杂交分析。结果共筛选出高危孕妇34例，分娩DS儿产妇1例，共16例接受母血中胎儿NRBC的荧光原位杂交(Fluorescenceinsituhybridization，FISH)分析。FISH结果示Down综合征儿2例，Turner综合征儿2例，男胎8例，女胎8例。除1例诊为Turner综合征胎儿的实际核型为正常二倍体男性外，其余15例FISH结果均与实际核型一致，诊断符合率为93．75％(15／16)。结论利用母血中胎

9、儿有核红细胞进行荧光原位杂交可成功诊断胎JL311j整倍体异常，在国内尚属首例，并为该无创性产前诊断技术走向