内嵌雪旺细胞生物膜支架神经导管的实验的的研究

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1、中文摘要目的：理想的组织工程化人工神经应该由具备特定三维支架结构的可降解神经导管和在支架上有序排列的雪旺细胞(sc)构成。本实验探讨用一种新的可降解生物材料制成雪旺细胞一神经导管复合物，观察其修复大鼠较长距离坐骨神经缺损的效果。材料和方法：实验分三部分。第一部分：大量获得新生鼠雪旺细胞的实验研究。雪旺细胞是周围神经系统特有的胶质细胞，对促进周围神经损伤后修复起重要作用。我们采用二次植块法、双酶消化法及二者的混合法分别培养sc，观察sc生长情况并进行了三种方法的比较。第二部分：雪旺细胞与不同结构的聚乳酸／羟基乙酸共聚物(PLGA)导管和PLGA生物膜生物相容性实

2、验研究。将Sc分别与神经导管和生物膜联合培养，观察sc与材料的相容性及生长情况，并用MTT法检测材料上sc的相对增殖度。第三部分：内置复合雪旺细胞PLGA生物膜支架神经导管的实验研究。采用PLGA制成的生物膜和sc共同培养，将富含sc的生物膜嵌入导管内制成人工神经，用这种支架材料桥接sD大鼠20mm长坐骨神经缺损，观察该人工神经修复周围神经缺损的效果。结果：采用二次植块和双酶消化混合法培养sC，通过用细胞计数，S-100染色及MTT法检测，经对比得知该方法较单纯的植块法或双酶消化法能够获得的sc数量更多，纯度更高。经Ara—C再次纯化后纯度无明显提高，但细胞的

3、增殖能力却有所下降。PLGA生物膜和导管分别与SC共同培养后，发现SC与两种结构的PLGA均具有良好的相容性，且黏附在材料上的SC经酶消化提取后用MTT检测发现仍然具有较高的增殖活性。用富含SC的生物膜置入导管后可以使神经导管内携带更多的sc，而PLGA生物膜的编织结构具有固定的排列顺序，从而使黏附的SC定向排列形成类似于Btlngner带。用之桥接SD大鼠20mm的神经缺损，通过一般观察、肌电图测量、组织学切片和图像分析测量再生神经轴突数量密度、轴突直径、髓鞘厚度等方面评价修复效果，均发现该结构可以有效地桥接神经缺损。结论：内置雪旺细胞一生物膜支架的神经导管

4、有利于神经再生，在修复神经缺损方面具有良好的应用前景。关键词：雪旺细胞神经导管周围神经聚乳酸／基乙酸共聚物(PLGA)组织工程中图分类号：R651．3R318．08ExperimentalstudyofanerveconduitincorporatedwithaSchwanncell．biomembraneintrinsicframeworkObjeetive：Anidealartificialnerveshouldbefabricatedwithabiodegradableconduitfilledwithaparticularthreedimensiona

5、lstructureandwell·alignedbioaetiveSchwanncells．ThisexperimentstudyexploredaSchwanncell-nerveconduitcomplextorepairanextensivesciaticnervedefectinaratmodel．Methods：西eexperimentwasdividedintothreeparts．功efirstpart：强PexperimentresearchonharvestingSchwanncellsingreatquantitiesfromneonat

6、alrats．Sehwanncellsarethemainglialcellsinperipheralnervesystemandplayaveryimportantroleinrepairingnervedefectsafterinjury．Weemployedthedouble-explantmethodandtwoenzymesdigestionaswellasthemixtureofabovemethodsrespectivelytoharvestSchwanncells．Tocomparewitheachmethod，weobservedthepro

7、liferationofSchwanncells．Thesecondpart：TestingthebiocompatiblityofSchwanncellsandconduitaswellasbiomembrane．WeseededSchwanncellsontoconduitandbiomembranerespectivellyinculture．111egrowthofSchwanncellsonthematerialswaSobserved．TherelativegrowthrateofSchwanncellswasassessedbyMTT．nethi

8、rdpart：Studyingthef