cbf1基因转化地被石竹与其抗寒性评价

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1、摘要本试验以地被石竹(Dianth郴chinese)为试验材料，将从拟南芥(ArabidopMs)中获得的CBFl基因通过农杆菌(Agrohacterium)介导的叶盘法进行了遗传转化，并对其进行了PCR检测，获得了4个转基因株系。同时，对转基因植株的抗寒性——经低温胁迫，离体叶片的相对电导率、游离脯氨酸含量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶的活性进行了初步的评价．以期获得抗寒性得到提高的转基因地被石竹．主要研究结果如下：1．对于获得的28个抗性株系进行了PER检测，其中4个株系的DNA经扩增后产生了与阳性对照相同的特异扩增条带，其片段大小约为640bp．这初步表明外源

2、基因已整合进地被石竹转化植株的基因组中．2．经低温胁迫后，随着温度的下降，叶片相对电导率呈。S”型上升趋势，转基因株系比对照株系(cI【)的相对电导率在各温度下均较低；-20"12时对照株系的相对电导率的上升幅度最大，达到505．03％，而转基因株系27的上升幅度最小，为439．84％．一16℃时，cK与株系27差异极显著，cI【与株系18差异显著；一20℃下，cK与株系27差异极显著．与株系12、18差异显著。3．对照植株在低温胁迫下，随着温度不断下降，脯氨酸含量上升幅度最大，达到了975．35％；各转基因株系12、18、25、27的脯氨酸含量上升幅度均小于对照

3、株系，分别为823．01％、747．59％、568．59％和531．28％，转基因株系27最小。在各低温处理下，转基因株系27的脯氨酸含量比对照株系高出500／o．-200％。从．4℃到-16'12。各株系脯氨酸含量增幅都较大，均在100％左右，到-20℃时，增幅有所减小，降低到509‘左右。4．经过不同低温处理后，各株系的丙二醛含量均有所增加．从O℃到．20℃，对照株系的丙二醛含量的增加量，各温度下分别为80．23‰12．14％。40．7％，39％以及33．42％，-4℃时增幅较大，其他温度下增幅比较平缓。转基因各株系在各温度下丙二醛的增长量相对较平缓，特别是从

4、．8℃开始增长量只有20％左右．5．经过低温胁迫后，各转基因株系和对照株系的SOD活性表现为随着温度的上升而增加，到-12"C时达到高峰，在．16℃时SOD活性又有所下降，达到峰值时，各株系的SOD活性分别为7．7、14．67、15．2l、12．32和15．87u／g．．12℃时，CK与各转基因株系SOD活性差异极显著，各转基因株系之间SOD活性差异不显著。关键词：CBFl基因；转基因；地被石竹；抗寒性TransformationofCBFlgeueintoDianthuschineseandEstimatingCold-mistanceofTransgenlcp

5、lantwithCBFIGeneAuthor：WuYamMajor：Fo惜时silviculture&lp日vi●∞：GuoBaolinY'mShupmgDi4nthl‘，chinesehadbeen翻looessfollytransformedusingabinaryVerY[M"plasmidpBPCBFlwhichcontainedachimericnopalinesynthase(NOS)promoterdrivenneomycinphosphotransferase(明叮／／)geneandacauliflowcrmosaicvirus35S(QlM乃5

6、S)promota"dtivmCBFI(CR影D_尼Ebindingfactor1)鲫c’如d4transgenicli嘣w锄obt血od．ResultsofmolecularanalysisbyPCRandphysiologicaltestsofcoldresistance,confirmedtheintegrationofCBFIgeneintothegenomcof山esecultivarL．11砖mainresealv,hreanltswere越follows：1．28transformedIinesWCI'edetectedbyPCRanalysis,a

7、nd4ofthemshowedthepositivebands∞∞忙asCBFlgene．PCRpositiveLinesindicatedtheintegrationolCBFlgeneintothegenomeofDianthtiffchinese．2．Therelativeelec啊cconductivityina℃ascda8S-eta-yeswiththetemperaturedecreased．Thcrelativeeledti'icconduefivityof4trandgeniclinesWCI'ele鹳thanCKineachtemperalre

8、ffeaU