调控表达tnfα抗乙型肝炎病毒的研究

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1、重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文作者签名：鱼垫日期：!翌!：!!生学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学

2、。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：鱼丝指导教师签名：围乡日期：z!：!：!!重庆医科大学硕士研究生学位论文英文缩写AmpHBsAgbpeDNACTLddH20DNAdNTPDMS0EBELISAEPFCSG418HhHBVHCCIFN-vkbkDLBLALHmlnMTT符号说明英文全称AmpieillinHepatitisBvirussurf

3、aceantigenBasepairComplementarydeoxyribonucleicacidCytotoxicTlymphocyteDoubledistilledH20DeoxyribonucleicacidDeoxyribonucleosideTriphosphateDimethylsulfoxideEthidiumbromideEnzymelinkedimmunosorbentassayEppendorfFetalcalfserumGeneticinHygromycinHOurHepatitisBVirusHepatocellularCarcinom

4、aInterferon—YKilobasepairKilodaltonLuria—BertaincultureLBmediumcontainingampicillinLBmediumcontaininglaygromycinMinuteMethylthiazolyltetrazolium中文全称氨苄青霉素乙肝病毒表面抗原碱基对互补脱氧核糖核酸细胞毒性T淋巴细胞双蒸水脱氧核糖核酸脱氧核苷三磷酸二甲基亚砜溴化乙锭酶联免疫吸附试验离心胎牛血清遗传酶素418潮霉素小时乙型肝炎原发性肝细胞癌干扰素叫千碱基对千道尔顿LB培养基含氨苄青霉素LB培养基含潮霉素的培养基分钟甲基噻唑

5、基四唑重庆医科大学硕士研究生学位论文ODPBSPCRRNArpmRT．PCRRNaseSecnqF一旺tetOpticcaldensityPhosphatebufferedsolutionPolymerasechainreactionRibonucleicacidRevolutionsperminuteReversetranscriptPCRRibonucleaseSecondTumornecrosisfactor-aTetracycline2光密度磷酸盐缓冲液聚合酶链反应核糖核酸每分钟转数逆转录聚合酶链反应RNA酶秒肿瘤坏死因子一位四环素重庆医科大学硕士研究生学

6、位论文调控表达TNF．伍抗乙型肝炎病毒研究1摘要第一部分：四环素调控双表达TNIF—q载体的构建及鉴定目的：构建在同一载体中可用四环素调控表达肿瘤坏死因子．cc(TNF．Ⅱ)的载体。方法：以pcDNA4TM／TO为模板，用PCR法扩增含四环素调控表达序列的片段TO(位于NdeI和SaclIZN)，插入pUCll8载体中测序，选择测序正确的序列取代pVITR03载体中相应的片段，构建成pVITR03-TO。用相同的方法以pcDNA6／TR为模板扩增四环素阻遏蛋白基因(TR)，经测序证实后插入pVITR03．TO载体的一个多克隆位点。用相同的方法扩增TNF．Ⅱ基因，经

7、测序证实后插入pVITR03一TO．TR载体的另外的一个多克隆位点。结果：用PCR成功扩增出四环素调控表达序列片段、四环素阻遏蛋白基因片段和n师．o【基因片段，亚克隆后各选2个克隆测序，均找到了序列正确的克隆，经内切酶双切后插入pVITR03中，完成了目的载体的构建。结论：成功构建四环素双表达调控表达TNF．c【载体(pVITR03一TO-TR—TNF-c【)。关键词：调控表达载体，构建，四环素本课题受国家自然基金项召资助，项目批准号：301001583重庆医科大学硕士研究生学位论文第二部分四环素调控双表达TNF-a载体在真核细胞内表达及调控目的：研究四环素调控双

8、表达TNF