粒细胞集落刺激因子治疗急性肾缺血再灌注损伤的研究

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1、原创性声明f㈣㈣㈣㈣删jY18349⋯⋯2⋯⋯1⋯本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被

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3、血液透析外尚无有效的治疗方法，是临床治疗的难点。其中缺血再灌注损伤是ARF最常见的病因，肾脏手术、肾移植及弥散性血管内出血均可引起肾脏缺血再灌注损伤，其主要的病理表现为急性肾小管坏死。另外，近年来研究指出：肾小管周血管的损伤也是肾功能衰竭的一个重要原因。因此，如何减轻肾小管的坏死、恢复肾小管的结构和功能及修复损伤的肾小管周血管是治疗ARF的重要切入点。粒细胞集落刺激因子(G．CSF)是体内一种重要的造血调节因子，是骨髓干细胞(包括造血干细胞、骨髓基质干细胞、内皮干／组细胞)强有力的动员剂，可大大提高外周血的干细胞数量。骨髓来源

4、干细胞是一群未分化的细胞，具有自我更新和多向分化潜能。已有大量研究报道：骨髓干细胞能够归巢到受损组织区域，参与损伤组织的修复，并能改善其功能，同时也可以分化成多种祖细胞。基于骨髓干细胞的这些特性，它已成为组织工程学的一种重要“种子”细胞，在心脏疾病、神经系统疾病中，骨髓干细胞移植中均表现出了肯定疗效。干细胞所具有的迁移、修复、替代和再生的能力为临床医学提供了一个发展新疗法的机会。依据干细胞的生物学特性及其在多种损伤性疾病中的治疗作中文摘要用，我们认为G—CSF动员骨髓来源干细胞治疗肾损伤疾病可能有效。本研究通过制各小鼠急性肾缺

5、血再灌注损伤模型，经皮下注射G．CSF动员骨髓干细胞，于注射后的不同时间点检测干细胞动员情况、肾功能指标(如BUN及Scr)、肾脏病理组织学、肾小管上皮细胞及小管周血管内皮细胞的增殖情况等指标，评价G．CSF在小鼠急性肾缺血再灌注模型中的疗效问题，并初步探讨G．CSF动员骨髓源干细胞治疗急性肾缺血再灌注损伤的机制。材料与方法选择18．209(6．8周龄)的BALB／c(H．2Kd)／J,鼠建立动物模型。80只小鼠采用无损伤微血管夹夹闭双侧肾蒂40分钟后随即分为G—CSF治疗组和I／R组，于再灌注后ld'时、3天、6天、9天，经

6、皮下注射G—CSF(10I_tg／kg)或等量的生理盐水。再灌注后第l天、4天、7天和10天时收集血样，流式细胞仪检测外周血CD34+细胞数，采用全自动生化分析仪测定血清肌酐和尿素氮。摘取双侧肾脏，行组织病理组织学检测，根据Paller标准对肾脏的病理改变进行评分，免疫组化染色检测CKl8及Ⅷ因子相关抗原(FⅧ．RAg)的表达情况，以CKl8阳性的肾小管上皮细胞数及FⅧ．Rag阳性的小管周血管内皮细胞数反应肾小管上皮细胞及小管周血管内皮细胞的增殖情况。结果1．成功建立小鼠急性肾缺血再灌注损伤模型，成功率可达90％。2．与I瓜组

7、对比，G．CSF治疗组再灌注后第1天、4天、7天和10天外周血中CD34+细胞数明显升高(P0．05)。再灌注后第4天和第7天，G．CSF治疗组较I／R组血清BUN值、Scr值明显降低(P<0．05)。再灌注后第10天，两组血清BUN值、SCr值无明显差别(P>0．05)；G．CSF治疗组小鼠的肾功能恢复较早。4．光镜下观察G。CSF治疗组的肾脏病

8、理改变较FR组明显减轻。再灌注后第1天I／R组和G．CSF治疗组肾脏HE评分两组之间没有差别沪>0．05)，再灌注后第4、7及10天时的肾脏HE评分显示，G—CSF治疗组的评分均较FR组明显减’低(Jp