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时间:2019-02-01
《多发性骨髓瘤微小rna基因序列突变的实验研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、硕士学位论文多发性骨髓瘤微小RNA基因序列突变的实验研硕士研究生t张凝宇指导教师:杜新教授摘要多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)是一种B细胞性恶性肿瘤,以骨髓巾浆细胞恶性克降增生,血清或尿液巾出现单克隆免疫球蛋白或其成分M蛋白,正常免疫球蛋白受到抑制以及广泛溶骨病变和/或骨质疏松为特征。多发性骨髓瘤在我国的发病率约为十万分之一至十万分之二,仅次于急性白血病,位居血液系统恶性肿瘤发病率的第二位,且有增长趋势。97%-99%的患者诊断时年龄超过40岁,随着年龄的增高发病率逐步增加,特别多发于60岁以上的老年人。尽管近年来在药
2、物治疗方面有一些进展,大部分多发件骨髓瘤患者还是由于复发和疾病进展而不能治愈。随着我国进入老龄化社会,这种老年性恶性疾病越来越常见,严重影响患者的生存时间及生活质量。目前人们对多发性骨髓瘤的发病机制还不清楚,已有的研究结果显示主要与遗传学改变和细胞因.了的作用两方面有关,但至今没有明确的答案。由于这利·疾病的发生发展涉及多个复杂的分了调控机制,研究进展相当缓慢。微小RNA(microRNA,miRNA)的发现为这方面的研究提供了一个新的思路,miRNA是一类广泛存在于真核细胞胞质内的单链小分了RNA,来源于内源性的发灾样转录产物,长约18
3、---25nt,不具有开放阅读窗(ORF),不编码蛋白质,作为--*1'序列特异、转录后抑制基因表达的调节因了,通过与互补mRNA完伞或不完伞配对,降解靶mRNA或阻遏其转录后翻译。miRNA有几百个靶基因,调控着一半以上的人类蛋白编码基因。通过调控靶基因miRNA参与生命过程巾一系列重要进程,中文摘要包括个体发育、造血生成、器官形成、细胞凋亡、细胞增殖与分化、脂肪代谢等。50%以上的miRNA位于人类基因组地图与肿瘤有关的区域,提示miRNA在肿瘤的发生中发挥了很重要的作用。目前已有研究发现miRNA的表达模式与遗传学异常有关,如miR
4、.1和miR.133a具有相同的染色体位点,在t(14;16)异常的的病例中过表达。一些miRNA在多发性骨髓瘤中选择性上调,并与一些肿瘤基因显著相关,如miR-181a和miR-181b在删中高表达,miR一17和miR-32在删及细胞系中选择性上调而在正常组巾无上调。miR一19a和miR-19b可下调抑痛基因SOCS-1的表达(SOCS一1在删巾常被沉默,作为IL一6抑制物发挥重要作用)。删巾miR-335,miR一342—3p,miR一561与三个过表达的宿主基因显著相关,可能在细胞归巢及与骨髓微环境的相互作用中发挥重要作用。通过
5、文献复习,在多发性骨髓痛巾表达异常的12种miRNA整理如下:miR-17,miR一32,miR一19a,miR一19b一1,miR一19b一2,miR一181a—l,miR一181a-2,miR一181b一1,miR一181b一2,miR-335,miR-342,miR-561。鉴于以上研究结果所显示miRNA与删的密切关系,对上述miRNA的深入研究显得尤为重要。miRNA的生成历经以下几个过程:基因转录产生长约300-1000bp的初始转录产物一原始微小RNA(pri—miRNAs),再由微小前体复合物(‘Microprocesso
6、r’一complex)加工成约70.90nt发夹样前体RNA(pre.miRNA);Pre-miRNA在exportin-5的作用下转运进入胞质,被另一个双链RNA特异性RNaseIII—Dicer识别,进一步切割成长约18—25nt的小分子RNA,即成熟的miRNA。由于miRNA的表达具有保守性,其基因序列的改变可能对下游的酶切修饰产生重大影响,从而在整个发病过程巾发挥作用。包括原始微小RNA(pri—miRNAs)、前体微小RNA(pre-miRNAs)和成熟微小RNA(maturemiRNA)的序列改变都会对miRNA的加工、选择
7、过程产生影响。国外研究表明存在于pri—miRNA巾的序列突变会影响pre-miRNA的成熟,存在于成熟miRNA巾的突变会直接影响miRNA的表达、成熟过程和与目标区域的结合。另外,miRNA巾突变的目标区域序列会改变miRNA的活性和(或)影响其目的基因的表达。目前关硕士学位论文于miRNA基因突变对肿瘤发生影响的研究还只限于急性髓细胞白血病,淋巴瘤,肝痛等,在多发性骨髓瘤中的研究还未见报道。因此本实验主要就多发性骨髓瘤中12个表达异常的miRNA基因序列突变进行研究,采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)银染法检测4种
8、人多发性骨髓瘤细胞系(KM-3,ARH-77,U266,RPMl8226)、20例多发性骨髓瘤患者和20例治疗后血液学指标恢复正常的非血液肿瘤患者骨髓标本中上述12利一miRNA基因突变情况,
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