姬松茸多糖的提取纯化与注射液的研制

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1、姬松茸多糖的提取纯化及注射液的研制摘要姬松茸(AgaricusblazeiMurill，ABM)是近年来新兴的一种食药兼用菌，因其富含多种活性成份，可作为免疫调节剂、抗癌剂、抗突变剂和抗菌物质的来源，因而引起全世界的极大关注。由于姬松茸具有多种生物活性，具有广泛的应用价值和前景，因而对其活性成分的提取分离就显得尤为重要。对于姬松茸多糖的提取分离纯化过程国内外有很多报道，技术比较成熟，但是以姬松茸多糖为主原料的保健食品或抗癌药物目前还少有报道。本论文以姬松茸粗多糖为原料，开发姬松茸多糖注射液，为其作为一种新型的抗癌辅助药物走向市场奠定实验依据。为保证姬松茸多糖注射液的安全

2、性，根据《中华人民共和国药典》及《中药、天然药物提取纯化工艺的相关规定》。选取了经济、安全、高效的分离、纯化、浓缩和干燥方法。首先Sevage法除蛋白，根据文献，确定氯仿：正丁醇为3：1，多糖浓度2nag·mL-1时，重复三次，除蛋白效果最佳；脱色采用了双氧水氧化法，为加快脱色时间，又要避免双氧水对多糖结构的破坏，实验在37℃下进行：透析、浓缩、干燥过程同样为了保证多糖结构的完整性和提取后物质疏松易溶解，先透析，然后60℃浓缩，最后是冷冻干燥。此时得到的多糖半纯品(AB)呈褐色，粉末状，经苯酚硫酸法和考马斯亮蓝G250法铡得总糖含量和蛋白质含量分别为85．4％和14．2

3、％。多糖半纯品通过DEAE．纤维素离子交换层析进行初步分级纯化，用0、0．1、O．3tool·L_1的NaCl洗脱，得到三个组分，分别是AB．I、AB．II和AB．1II，其中AB．I为中性多糖，AB．II和A&Ⅲ为酸性多糖。AB—I、AB．II和AB．In分别再通过SepharoseCL-4B凝胶层析迸一步分级，A良I得到单一对称峰，透析干燥后为淡黄色粉末，AB．II和AB．IIl在主峰之前分别有一小峰，收集主峰，得到AB．II．b和AB．m．b，透析干燥后分剐呈黄色和褐色粉末。A西I、AB—II—b和AB—HI．b经纯度鉴定后，表明为均一的多糖，总糖含量为91．8％

4、、90．4％和89．2‰蛋白质含量为7．1％、S．8％和9．3％。为了进一步探讨分离纯化的多糖半纯品AB及其组分AB．I、AB．II-b和AB．III．b的免疫药理作用，我们使用环磷酰胺建立-rd,鼠免疫低下模型，并对多糖处理前后小鼠的免疫功能变化情况进行了检测，如免疫器官重量试验、外周血血象测定、腹腔巨噬细胞吞噬试验、溶血素生成试验、E玫瑰花环形成试验、淋巴细胞转化试验，从非特异性免疫、细胞免疫和体液免疫方面全面检测它们的免疫药理作用。结果表明环磷酰胺致小鼠免疫低下模型建立成功，四个多糖均能弱化环磷酰胺对机体的毒副作用，并且有的指标能达到空白对照组水平，正常／JV鼠经

5、四个多糖免疫后，与空白对照组相比除淋巴细胞转化试验外，均为差异极显著(P

6、对注射液的中间体进行质量安全性试验：急性毒性试验、肌肉局部刺激试验、过敏试验和溶血试验，试验结果均符合相关规定，表明姬松茸多糖注射液可以用于肌肉注射和静脉注射，无毒副作用，不会产生不良后果。综上所述，姬松茸多糖是一种良好的免疫增强剂，可以弱化环磷酰胺对机体的毒副作用，初步制得注射液后，肌肉和静脉注射对机体无不良效果，如果应用于临床可与常规化疗药物配伍使用，加大疗效，保护正常细胞免受药物损伤，因此可以开发作为新型抗癌辅助药物，造福人类。关键词：姬松茸，多糖，提取纯化，免疫低下，注射液TheExtractionandPurificationandInjectionPrepa

7、rationofPoIysaccharidefromAgaricusB／azeiMuriIAbstractAgaricusblazeiMurill(ABM)isakindofnewedibleandmedicalfungusinrecentyeats．Thismushroomhasbeenattractingattention笛a$otn'ceofimmunomodulators，anticarcinogem，antimutigensand龃tib∽terialsubstances．Itcontainsrichbiologicalacti