n乙酰βd氨基葡萄糖苷酸试剂盒制备与其临床应用的研究

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1、浙江人学硕士学位论文中文摘要N．乙酰．p．D．氨基葡萄糖苷酶试剂盒制备及其临床应用研究浙江大学医学院硕士研究生导师中文摘要内分泌与代谢病徐秀芬李红1NAG试剂盒制备目的：制备符合临床检测要求的NAG测定液体试剂盒。方法：采用vRA-NAG为底物，选择合适的缓冲液体系、底物浓度及表面活性剂，制备NAG测定液体试剂盒，并对其线性、精密度、准确度、稳定性和抗干扰性等性能进行评价。结果：NAG活性在100IIlIIlo忱柠檬酸缓冲液pH5．8时最大，pH在5．o．6．6之间相差不大，考虑到底物稳定性，选用缓冲液pH5．0作为NAG测定最佳值。根据米氏方程测得

2、Km值为0．32mm01／L，因此，将NAG测定的底物浓度定为Km值的10倍量3．2mm01／L作为NAG测定试剂的最佳底物浓度。底物溶液中添加O．1％的Tween20和O．1％的BSA，有助于底物溶解及稳定。NAG活性在O．360U／L范围内线性良好。批内CV低值标本为1．74％，高值标本为0．86％；批间CV低值标本为3．21％，中值标本为1．65％，高值标本为1．08％。平均回收率为103．7％。试剂开瓶7天和保存一年，稳定性均较好。维生素C浓度在50mg／L以下对本法测定结果基本无干扰，高浓度将产生负干扰，使测定结果偏低。乳酸<0．9g／L、

3、丙酮酸<20mg／L、酒石酸<17mg／L、尿酸

4、有肾病组NAG值为40．6士13．4U／L，均较对照组7．2士2．8U／L明显升高(p

5、关键词：N．乙酰．D．D．氨基葡萄糖苷酶；试剂盒；糖尿病肾病V浙江大学硕1：学位论文英文摘要N—acteyl—p—D—glucosaminidaseassayldtanditsclinicaIapplicationMedicalSchoolofZhejiangUniVersi够GraduateStudentSupenrisorAbstractEndocrinologyandMetabolismXuxiufenLihong1N—acteyl-p—D—glucosaminidase(NAG)assayldtPreparationAim：1bpr印arel

6、iquidNAG觞say虹tforclimcaltestir培．Methods：useVRA-NAGaSsubsn．ate，selectappro研atebu蔬rsyStem，concen仃ationofsubsn．ate，锄ds删沁eactiveagent，prep删ionLiquidNAG2Lssaybtand“aluateditS1ine撕劬precisioIl，aCcuraCy，st￡Lbil埘and觚ti-jaIllIllingandotllerproperties．Results：NAGaCtivi够isma)【imumhl100mmol

7、／LpH5．8ci仃icaucidbu脏r，mereislittledi行erencebe帆：enpH5．O-6．6，andt撕ngintoaccoutoftlles诅bilit)，ofthesubstrate，、ⅣechoosepH5．Oast11ebeStvalueofNAGdetemination．AccordingtoMichaelis．Mentenequa瞳ion，Kmvalueis0．32mmoⅥ。，therefore，Wechoose1OtimesoftheKmvalue3．2mmol／LaSthebeStsubstrateconcen

8、仃ationofmeNAGaSsay玉【it．AddO．1％Tween20锄d0．1％BSAtosubstr