n乙酰βd氨基葡萄糖苷酶活力的影响

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1、万方数据第47卷第6期2008年11月厦门大学学报(自然科学版)JournalofXiamenUniversity(NaturalScience)V01．47No．6NOV．2008养殖常用抗菌药物对凡纳滨对虾外壳膜N一乙酰一伊D一氨基葡萄糖苷酶活力的影响杜娟1，安刚1，谢晓兰2，黄乾生1，王烨1，陈清西1’(1．厦门大学生命科学学院．细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室，福建厦门361005I2．泉州师范学院化学与生命科学学院，福建泉州362011)摘要：研究几种抗菌药物对凡纳滨对虾壳膜N-乙酰母D氨基葡萄糖苷酶(NAGase．EC3．2．1．52)活力的

2、影响．结果表明，诺氟沙星和磺胺甲嚼唑对该酶活力有不同程度的抑制作用，盐酸环丙沙星对此酶有激活作用，而青霉素钾、链霉素、庆大霉褒、卡那霉素、磺胺嘧啶等对酶活力基本上没有影响；磺胺甲唔唑的抑制作用最为显著．导致酶活力下降50％的抑制剂浓度(JG。)为0．094rag／mL．抑制作用动力学研究结果表明．磺胺甲嚼唑对酶的抑制作用为混合型可逆抑制，其抑制常数KI为5．98mg／mL．对酶一底物络合物的抑制常数Km为13．08mg／mL．该研究对凡纳滨对虾的人工养殖具有一定的参考价值．关键词：凡纳滨对虾；N．乙酰一p胁氨基葡萄糖苷酶；抗菌类药物；酶活力；抑制机理中图分类号：

3、Q356．1文献标识码：A文章编号：0438．0479(2008)06-0883-04N一乙酰一pD氨基葡萄糖昔酶(NAGase，EC3．2。1．52)是几丁质酶水解系统的一个组成成分，它能协同内切几丁质酶、外切几丁质酶将多聚壳聚糖分解成N一乙酰一pD氨基葡萄糖(NAG)，具有促进食物消化吸收、疾病防卫、生长发育的重要生理功能【l】．凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)，俗称南美白对虾或太平洋白对虾，是目前世界上三大养殖对虾中单产量最高的虾种，味道鲜美营养高，是国内外市场的畅销品种，深受广大消费者喜爱．然而近年来大规模爆发的对虾流行性疾病，使我国

4、乃至世界的对虾产业受到各种对虾疾病的困扰，并遭受了重大的经济损失，对虾养殖业严重受阻[2]．为了有效地控制和治疗疾病，养殖者必须选择合适的水产药物并正确地使用【3]．目前，越来越多的医用、兽用药物应用到水产养殖中，但使用抗生素类、磺胺类、喹诺酮类等养殖常用药物对药物治疗水生动物的细菌性疾病时，大多是借鉴兽医对哺乳动物的研究成果，因此，造成该类药物在水产业疾病防治用药的盲目性【‘]．研究与对虾生长发育密切相关的生理生化因子NAGase的调控对疾病的防范，树立科学用药的观念，对对虾养殖业的可持续发展具有重要的意义[5]．本文分析了几种养殖常用抗菌药物对凡纳滨对收稿日

5、期：2008—01-10基金项目：福建省科技重点项目(2006N0067)．厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室开放课题(2007108)资助-通讯作者：chenqx@xlnu．edu．cn虾NAGase活力的影响，有利于了解药物对NAGase的调控作用，这为我国水产药物的监管提供一定的科学依据并对对虾养殖过程中的疾病防患及NAGase的活力调控具有重要的指导作用．1材料与方法1．1材料与试剂N一乙酰—pp氨基葡萄糖苷酶从凡纳滨对虾壳膜参考文献[6]方法分离纯化得到，为电泳单一纯酶制剂．对一硝基苯一N一乙酰一p肛氨基葡萄糖苷(pNP—NAG)购于上海

6、医药工业研究院生化室，庆大霉素为天津药业集团产品，青霉素钾、链霉索、卡那霉索，磺胺嘧啶、磺胺甲嗯唑为河北远征药业有限公司产品，氟哌酸(诺氟沙星)、盐酸环丙沙星为抗生素片剂，实验前去除片剂的外膜取内部成分进行试验，其他生化试剂均为国药集团化学试剂有限公司生产，使用的蒸馏水均为玻璃重蒸水．1．2方法1．2．1酶蛋白浓度的测定酶浓度测定采用Folin一酚法．1．2．2酶活力的测定酶活力的测定参考文献[63：以pNP—NAG为底物，在2mL测活体系中，包含0．1mol／LpH5．2NaAc-HAc缓冲液和0．25mmol／L的底物，置37℃恒温水浴，加入10肛L酶液，准

7、确反应10min，加入2万方数据·884·厦门大学学报(自然科学版)2008正mL0．5mol／L的NaOH终止反应．在BeckmanUV一650型分光光度计上测定波长为405nm的吸光度(0D懈。。)，光径为icm，以pNP为产物对照，测得该条件下产物的消光系数为8．8×103L／(tool·era)．酶活力单位定义为在上述条件下，每分钟水解底物产生1／amol／L产物的酶量．1．2．3抗菌药物对酶活力作用的测定采用1．2．2酶活力测定方法，在测活体系中，加入不同浓度的药物溶液，测定出酶的相对活力，分析它们对酶活力的影响．以不加效应物在相同测活体系测定活力为对

8、照．一种药物均设计3组平