唑来膦酸联合紫杉醇抗人鼻咽癌hne1细胞的实验研究

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1、学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保

2、密的有关规定和程序处理。本论文属于：保密()，在年解密后适用本授权声明。不保密( √ )。(请在以上括号内打“√”)作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月硕士学位论文黄婉兰：唑来膦酸联合紫杉醇抗人鼻咽癌HNE1细胞的实验研究摘要背景与目的鼻咽癌（NasopharyngealCarcinoma，NPC）是我国南方常见的恶性肿瘤，中国发病率为10～30/10万，其中以广东省高发，发病率达30～50/10万，有“广东癌”之称。放疗或联合化放疗是鼻咽癌主要治疗手段，但局部复发及远处转移仍是治疗失败的主要原因，骨为最常见转移部位之一。紫杉醇（Paclitaxel，TAX）为复发或转移性鼻咽癌的常用治

3、疗药物，能提高疾病缓解率和局部控制率，但未能提高总生存率，合适应用方法仍未确定。唑来膦酸（Zoledronicacid，ZOL）通过抑制肿瘤细胞的增殖、分化，诱导细胞凋亡，降低肿瘤细胞的迁移、侵袭能力，抑制肿瘤新生血管形成，刺激T淋巴细胞增殖等多种途径直接或间接发挥其抗肿瘤作用。本课题组先前研究发现ZOL能直接抑制人鼻咽癌HNE1肿瘤细胞的增殖，降低肿瘤细胞的迁移、侵袭能力，抑制血管形成。临床上，唑来膦酸主要用于预防和治疗肿瘤骨转移，减少病理性骨折、脊髓压迫和高钙血症等骨相关事件（skeletal-relatedevents，SREs）发生；联合抗肿瘤药物对前列腺癌、肺癌和乳腺癌等有协同抗

4、肿瘤作用。已有研究表明ZOL联合TAX对乳腺癌细胞系、前列腺癌细胞系、有高危骨转移肺腺癌细胞系均有协同抗肿瘤作用，但ZOL联合TAX对鼻咽癌细胞系的抗肿瘤作用及相关机制尚未有研究报道。本研究通过体外实验研究，观察ZOL与TAX不同联合方式对人鼻咽癌HNE1细胞增殖和凋亡的影响，并探索合适的联合治疗方式及其抗肿瘤作用的相关机制，为临床上合理应用紫杉醇联合唑来膦酸治疗鼻咽癌提供理论依据。方法第一部分唑来膦酸联合紫杉醇不同序贯用药方案对鼻咽癌HNE1细胞作用研究1.实验分组：①阴性对照：无加药培养72hr；②TAX单药组：TAX10nmol/L培养48hr，I硕士学位论文黄婉兰：唑来膦酸联合紫杉醇抗

5、人鼻咽癌HNE1细胞的实验研究无加药培养基再培养24hr；③ZOL单药组：ZOL20μmol/L培养48hr，无加药培养基再培养24hr；④ZOL+TAX联合组：ZOL20μmol/L+TAX10nmol/L培养24hr，无加药培养基再培养48hr；⑤TAX序贯ZOL组：先用TAX10nmol/L培养24hr后，换用ZOL20μmol/L培养24hr，无加药培养基再培养24hr；⑥ZOL序贯TAX组：先用ZOL20μmol/L培养24hr，换用TAX10nmol/L培养24hr后，无加药培养基再培养24hr。2.MTT法检测ZOL和TAX联合不同序贯方案对HNE1细胞的抗增殖作用。3.流式细胞

6、术（FCM）检测ZOL和TAX联合不同序贯方案对HNE1细胞的凋亡诱导作用。4.原位末端标记法（TdT-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL）检测ZOL和TAX联合不同序贯方案对HNE1细胞的凋亡诱导作用。5.实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）检测ZOL和TAX联合不同序贯方案对HNE1细胞Bcl-2、Bax、Caspase3和Caspase9mRNA表达的影响。6.WesternBlot检测ZOL和TAX联合不同序贯方案对HNE1细胞Bcl-2、Bax、Caspase3和Caspase9蛋白表达的影响。第二部分紫杉醇抗人鼻咽癌HNE1细胞增殖和凋亡作用的实验研

7、究1.MTT法检测不同浓度（0、2.5、5、10、20、40、80nmol/L）紫杉醇对HNE1细胞的抗增殖作用。2.FCM检测不同浓度（0、5、10、20nmol/L）紫杉醇对HNE1细胞的早期凋亡诱导作用。3.TUNEL检测不同浓度（0、5、10、20nmol/L）紫杉醇对HNE1细胞的诱导凋亡作用。结果第一部分1.ZOL和TAX联合不同序贯方案对HNE1细胞均有增殖抑制作用。TAX单药组、Z