hcovnl63和hcov229e血清igg抗体elisa检测法的建立与初步应用

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1、分类号：R373.1学校代码：10392学科专业代码：100208学号：200901308福建医科大学硕士研究生毕业论文HCoV-NL63和HCoV-229E血清IgG抗体ELISA检测法的建立及初步应用DevelopmentandPreliminaryApplicationofELISAsforDetectingSerumIgGAntibodiestoHCoV-NL63andHCoV-229E学位类型：医学硕士所在学院：省立临床医学院研究生：吴方波学科、专业：临床检验诊断学导师：伍严安教授研究起止日期：2010年10月至2

2、012年1月答辩日期：2012年6月8日二○一二年六月万方数据-1-万方数据目录缩略词…………………………………………………………………3中文摘要………………………………………………………………4英文摘要………………………………………………………………5前言……………………………………………………………………6材料与方法……………………………………………………………7结果……………………………………………………………………21讨论……………………………………………………………………30小结………………………………………………

3、……………………33参考文献………………………………………………………………34致谢……………………………………………………………………37综述……………………………………………………………………38-2-万方数据缩略词表缩略语英文全称中文全称ELISAEnzyme-linkedImmunosorbentAssay酶联免疫吸附试验HCoV-NL63HumanCoronavirusNL63人类冠状病毒NL63HCoV-229EHumanCoronavirus229E人类冠状病毒229EARTIAcuteRespiratoryT

4、ractInfections急性呼吸道感染PCRPolymeraseChainReaction聚合酶链反应RT-PCRReverseTranscription-PolymeraseChainReaction逆转录-聚合酶链反应AmpAmpicillin氨苄青霉素SARSSevereAcuteRespiratorySyndrome严重急性呼吸综合征NNucleoprotein核衣壳蛋白EEnvelopeprotein包膜蛋白PBSTPhosphateBufferedSalineTween磷酸盐吐温缓冲液-3-万方数据HCoV-

5、NL63和HCoV-229E血清IgG抗体ELISA检测法的建立及初步应用【摘要】目的分别建立人冠状病毒NL63（HumanCoronavirusNL63,HCoV-NL63）和人冠状病毒229E（HumanCoronavirus229E,HCoV-229E）的血清酶联免疫吸附检测法（Enzyme-linkedImmunosorbentAssay，ELISA），检测两种病毒血清IgG抗体，对其在福州地区儿童和青少年人群中的感染情况进行流行病学调查。方法分别设计HCoV-NL63核衣壳蛋白基因3’端463bp、HCoV-229

6、E核衣壳蛋白基因3’端514bp片段的引物。扩增这两个片段并将其克隆到pET-22b(+)载体上，并转化到表达宿主大肠杆菌BL21，然后对克隆菌进行鉴定。通过诱导剂诱导蛋白表达，对表达的重组蛋白进行纯化、鉴定。以经过鉴定的纯化重组蛋白为抗原建立血清ELISA法。以此法检测收集到的442份0-20岁血清标本中两种病毒抗体，最后对结果进行比较分析。结果1、442份血清样本中，HCoV-NL63抗体阳性277份(62.7%)。其中，≤6月婴儿阳性率50.6%（40/79）；>6～12月婴儿阳性率67.1%(19/28)；>1～5岁

7、个体阳性率73.1%（125/171）；>5～10岁个体阳性率62.5%（55/88）；>10～20岁个体阳性率50%（38/76）。2、HCoV-229E抗体阳性241份(54.5%)。其中，≤6月婴儿阳性率49.4%（39/79）；>6～12月婴儿阳性率64.3%（18/28）；>1～5岁个体阳性率70.8%（121/171）；>5～10岁个体阳性率48.9%（43/88）；>10～20岁个体阳性率26.3%（20/76）。结论1、成功建立了HCoV-NL63和HCoV-229E血清抗体的ELISA检测法。2、HCoV-

8、NL63与HCoV-229E是福州地区儿童和青少年呼吸道感染的常见病原体，不同年龄段的阳性率可能有差异。3、本研究结果为福州地区儿童和青少年呼吸道感染的防治提供了重要资料。所建立的检测方法具有进一步用于相关临床检测与研究的前景。-4-万方数据【关键词】人冠状病毒NL63，人冠状病毒229E