elisa和ifa法检测sars患者病毒抗体igg和igm的比较

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1、ELISA和IFA法检测SARS患者病毒抗体IgG和IgM的比较作者：李穗芬谭奕洲唐漾波刘丽儿袁小珍唐小平尹炽标【关键词】ELISA【摘要】目的探讨SARS患者体内SARS病毒抗体产生的规律及比较IFA和ELISA法的特点。方法采用间接免疫荧光技术（IFA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）对43例SARS患者双份血清及10例正常人双份血清的SARS病毒IgM/IgG抗体进行检测。结果43例患者中新近感染SARS病毒40例（93.02%），3例未检出其感染。发病10天内检出率较低，发病10天后检出率较高。阳性率随发病时间而上升。在SARS

2、病毒IgG的检测中，ELISA法较IFA法敏感。结论IFA法和ELISA法均适合于SARS发病10天后实验室辅助诊断方法，ELISA法较IFA法敏感。关键词SARS病毒酶联免疫吸附试验间接免疫荧光技术IgMIgGTheparisonbetethodsfordeterminingantibodiesofIgGandIgMinpatientse（SARS），parethecharacteristicsofIFAandELISA.MethodsTheSARSvirusIgM/IgGantibodiesofdoubleserumsof43pat

3、ientsalcontrolseofdiseasetakingbadELISAismoresensitivethanIFAinthedetectionofSARSvirusantibodyIgG.ConclusionBothIFAandELISAarefitforthelabassistantdiagnosisofSARSthattakingbadmorethan10days，ELISAismoresensitivethanIFA.Keyelinkedimmunoadsorbedassayindirectimmunefluorescen

4、tassayIgMIgG在临床上有多种病原体可以引起肺炎等呼吸道疾病，较常见的有细菌、病毒、衣原体、支原体、立克次体等。一种新型冠状病毒被确认是引起传染性非典型肺炎即重症急性呼吸道综合征（severeacuterespiratorysyndrome，SARS）的病原［1］。世界卫生组织已正式将此病毒命名为SARS病毒。为了解SARS患者血清抗体产生的规律，本项研究用间接免疫荧光法（IFA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）对广州市第八人民医院的SARS病例和正常人血清SARS抗体进行检测。为SARS的特异诊断提供依据和参考，同时也比较了两

5、种方法的特点。1对象与方法1.1对象与样品收集43例SARS患者均为2003年2～3月期间广州市第八人民医院收治的住院患者，诊断符合广东省SARS的诊断标准，男19例，女24例，年龄11～84岁（平均41.09岁），在本院的住院天数为6～40天（平均17.53天），留取以上研究对象住院初期及之后的双份血清，以发热症状出现作为其起病时间，第一份血清距起病时间为0～19天（平均5.3天），第二份血清距起病时间为6～33天（平均16.23天），两份血清采集时间相距2～23天（平均10.93天）。另选取10例正常人的双份血清作对照组同时进行检测

6、。1.2试剂、仪器1.2.1IFA试剂盒由广东省疾病预防控制中心微生物所提供。ELISA试剂盒:由北京华大吉比爱生物技术有限公司提供。1.2.2仪器日本OLYMPUS荧光显微镜，荷兰ALISEi全自动酶免分析仪。1.3实验方法1.3.1IFA实验方法待测血清56℃30min灭活，每份血清标本用0.05mol/L、pH7.2磷酸缓冲液（PBS）分别稀释到1∶20和1∶80两个稀释度，（IgM1∶20，IgG1∶20和1∶80）每个稀释度各取10μl分别滴加在抗原片的不同孔上。将玻片置37℃湿盒中，检测IgM抗体放置60min，检测IgG抗

7、体放置30min。反应完成后将玻片取出，用PBS冲洗5次，晾干。在荧光显微镜下观察染色结果，根据胞浆或胞膜部位有无特异性荧光来判断检测结果。1.3.2ELISA实验方法对照孔分别直接加入50μl阴、阳性对照，其余检测孔加入样品稀释液100μl/孔。加入待测样品10μl（IgM加入已用生理盐水稀释10倍的待测样品）混匀，37℃30min（IgM37℃60min）。洗板5次，拍干、分别加入相应的酶标抗体，37℃20min。洗板5次、拍干，每孔加入底物A、B液各50μl，37℃避光10min。每孔加入终止液50μl，以空白调零，置酶标仪450

8、nm波长下检测OD值。1.4结果断定大于Cutoff值为阳性:IgMCutoff值=0.11+阴性对照OD均值;IgGCutoff值=0.13+阴性对照OD均值。1.5新近感染判定标准实验结果符合以下任何一