浅谈ELISA法检测抗戊型肝炎病毒IgM抗体.pdf

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1、228世界最新医学信息文摘2013年第13卷第5期·医学检验·浅谈ELISA法检测抗戊型肝炎病毒lgM抗体赵玉莹(黑龙江省口腔病防治院，黑龙江哈尔滨150000)摘要：目的探讨ELISA法检测抗戊型肝炎病毒IgM抗体。方法运用ELISA法检测抗戊型肝炎病毒IgM抗体。结论检测时应严格按照说明书要求操作，防止交叉污染。关键字：检测检验；ELISA法；戊型肝炎病毒；抗体中图分类号：R575．1文献标识码：BDOI：10．39698．issn．1671—3141．2013．05．1680引吾孔内液体，再以洗涤液注满各孔，静置lmin后吸干，如此反复洗涤4次。将HEV蛋白结

2、构区的3种重组抗原成分，包被于聚苯乙烯酶标板的反应孑L中，加入待测血清或血浆，经孵育若4．4加酶标记物存在特异性抗体将与固相的HEV抗原结合。充分冲洗反应除空白孔外。其余孔各加lOOffl酶标记物。孔以祛除未结合成分，再将辣根过氧化物酶标记的鼠抗人4．5孵育及洗涤IgM抗体加入反应孔中，酶结合物将结合到先前形成的抗原37℃水浴孵育30min，用洗板机洗板。洗板机先吸去板抗体复合物上，反复冲洗反应孔，祛除未结合的酶结合物，孔内液体，再以洗涤液注满各孔静置lmin后吸干，如此反然后向每孑L中加入底物液一一四甲基联苯胺(TMB)溶液。复洗涤5次。若反应体系出现蓝色反应，表

3、明标本中存在HEV特异性抗4．6加底物体，加入盐酸终止呈色反应，用酶标仪在450nm波长下测加TMB底物100l／孔，37℃闭光显色10min，加终定反应体系的吸光度，吸光度与待测样本中的特异性抗体止液50ul／孔。数量成正比。4．7检测0D值1标本采集用MK2酶标仪比色，以450nm(单波长)或450nm／使用新鲜无抗凝或肝素钠抗凝动脉血或静脉血2～3ml，630nmf双波长)测各孔OD值。4．8结果审核离心(1500～3000r／rain)分离血清。不能立即测定的标在LIS系统审核结果。本应于2～8℃保存，但不应超过3d。样本中不可添加叠氮钠防腐，因为叠氮钠会影

4、响辣根过氧化物酶的活性。5质量控制2试剂5．1测定频率2．1试剂来源每批标本均设置阴、阳性对照及l临界值质控血清。s北京万泰生物技术有限公司提供的戊型肝炎病毒IgM为样品OD值，c0为临界值(Cut—off)。抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)。5．2接受标准2．2试剂组成当临界值血清的s／c0值超出X±2S范围时，系统处包被板12孔x8条，直接使用，按检测所需人份取板于警告状态，应予注意；当临界值血清的s／c0值超出条量；阳性对照血清、阴性对照血清各160l／瓶，稀释32±3S范围时定为失控，则参照免疫科室内质控失控处理液100ml／瓶，TMB底物、终止液各30ml／瓶

5、，均直接使程序检查失控原因。用，用前必须恢复至窒温和完全摇匀，用后保存于28oC；5．3质控检测完成后，在ELISA项目室内质控记录表酶结合物70ml／瓶，用前根据标本量将酶原液按1：200上登记质控；参照Levey—jennings质控图控制，发现失控时填写失控报告，查出失控原因并做相应的处理。以标本稀释液配制成应用酶结合物，酶原液用后保存于2—8℃；浓缩洗涤液120ml／瓶，用前以新鲜蒸馏水或去5．4质控品于2～8℃保存，开封后需在1周内用完。离子水稀释25倍后备用，若有结晶，应置室温溶解后再稀使用前需置室温20rain，并充分振荡、摇匀。释备用。6注意事项2-

6、3质控品6．1用前试剂盒各组分应在室温中平衡后再开封启用。为试剂盒提供的阴阳对照。6．2空白对照孔的吸光度应≤0．100。每个阳性对照孑L3．仪器的吸光度与空白对照孔的吸光度的差值必须≥O．500。6．3阳性对照孔和阴性对照孔的平均吸光度差值LD5—10B型离心机；2510变频振荡器；恒温水浴箱；fRcx—NRcx)应≥0．400，提示检测结果可靠。否则应怀EGATE一2310洗板机；MK3酶标仪。疑技术问题，检测必须重新进行。4操作步骤6．4如果RCX—NRCX值持续偏低，应怀疑试剂变质。4．1加样品稀释液6．6未用完的包被板应及时用自封袋封存。除空白~Lgl,，

7、各孔分别加入200l样品稀释液。6．7试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室4．2加样检查规程操作．不可用不同批号的试剂盒中的试剂相互代设空白1孔，阴、阳性对照各2孑L。除空白孔外，分别替。加入10l阴、阳性对照物。样品孔加入10l样品。6．8阴、阳性对照物、酶结合物、酶标板必须固定匹4．3孵育及洗涤配使用。37℃水浴孵育30rain，用洗板机洗板。洗板机先吸去板(下转第251页)世界最新医学信息文摘2013年第l3卷第5期231疗的患者血清样本不适合用本方法进行检测⋯。层粘连蛋白(1aminin，LN)是一种大分子非胶原糖蛋白，6．4发生严重溶血、脂血或浑