三参汤治疗糖尿病肾病的实验分析

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1、素Ⅱ(AngiotensinⅡ,ATⅡ)和内皮素-1（Eendothelin,ET-1）含量等实验指标的影响，以中医理论为指导，根据“肾小球血流动力学改变是DN蛋白尿发生的始动因素，并且在推动DN微血管病变最终形成肾小球硬化的过程中发挥关键作用”理论，从肾小球血流动力学改变等方面结合中医学理论分析三参汤治疗糖尿病肾病的作用机理，以期揭示三参汤治疗早期糖尿病肾病的作用机制；研究证实淤血在DN形成过程中的作用机制，以及益气养阴中药能否具有改善糖脂代谢的作用，益气活血能否调节血管活性因子表达分泌和代谢，改善微循环炎症等作用。78正文1实验材料和方法1.1实验对象选雄性8周龄SPF级SD大鼠（体重20

2、0g～250g）50只，由广西医科大学实验动物中心提供（动物号：NO0001628,许可证号：SCXK桂2003-0102），动物一般状态良好，皮毛光泽，进食与活动均正常。1.1.1实验分组将造模成功大鼠依尿微量白蛋白含量随机分为3组，分别为模型组、对照组、治疗组，与空白组共四组。1.1.2实验药物治疗组灌胃用方三参汤由三七、西洋参、丹参、黄芪、川芎、生地、白芍药、水蛭、大黄、甘草组成。上方购于南宁市湘君大药房，由广西中医学院中医基础理论实验室煎制。三参汤水煎、水浴浓缩成含生药120%悬浊液，低温保存。阳性对照组给予临床常用药物血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂厄贝沙坦片(安博维)，由杭州赛诺菲安万特民生

3、制药有限公司生产，购于南宁市湘君大药房，规格：150mg/片，每次50mg/kg，用前配制成混悬液。模型组及空白组给予等量生理盐水。STZ为美国sigma公司产品，购于南宁天地扬生物科技有限公司。1.1.3主要仪器与试剂血糖试剂盒：南京建成生物工程研究所，胰高血糖素试剂盒（50T）尿微量白蛋白试剂盒：南京建成生物工程研究所，白蛋白试剂盒（100T）Elisa试剂盒：由上海百沃生物科技有限公司生产，南宁天地扬生物技术有限公司提供9离心机：5810R，EppendorfCentrifuge紫外分光光度计：UV-1800，岛津紫外分光光度计酶标仪：MultiskanMk3，Thermo（Electr

4、onCorporation）电子天平：AG285，MettlerToledo超低温冰箱：MDF-U53V，Sanyo1.2实验方法1.2.1实验模型制备大鼠预饲养3日后,据体重随机取40只大鼠建立DN模型。一次性尾静脉注射STZ55mg/kg体质量复制DN模型，STZ临用前溶于新配臵的0.1mmol/L的枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液（PH=4.2），10分钟内注射完毕[1]。另10只给予等量生理盐水作空白对照组。于注射STZ后给予蔗糖水(15g/L)48h以减少早期死亡。1周后尾静脉取血测定空腹血糖，≥15mmol/L者继续进入研究。测血糖后连续两周每日每鼠皮下注射长效胰岛素2～4单位以防止发生酮尿

5、。给予STZ后第21日用代谢笼分别准确收集大鼠24h尿量，尿微量白蛋白≥65mg/dl者可确认DN造模成功。将造模成功大鼠依尿微量白蛋白含量随机分为3组，分别为模型组、对照组和治疗组（给予高脂饲料喂养），与空白组（给予普通饲料）共4组，排除不成模动物，每组各10只，于分组次日给药治疗。1.2.2实验给药方法造模成功的大鼠随机分为模型组（10只）、治疗组（10只）、对照组（10只），与空白组（10只）。自造模第22日起连续灌胃给药，药物干预以6倍成人剂量灌胃给药（成人体质量以60kg计算）。治疗组给予三参汤7ml〃kg-1〃d-1；对照组给予厄贝沙坦50mg〃kg-1〃d-1。稀释成3ml、水浴

6、加热至室温灌胃，模型组及空白组给予等体积生理盐水。每日1次，连续3周。药物干预3周后，禁食不禁水，收集大鼠24小时尿液后准备实验取材。2实验指标的记录和测定102.1实验取材2.1.1尾静脉取血大鼠在药物干预1周后，大鼠行乙醚浅麻醉，用一毫升注射器抽取大鼠尾静脉血0.1-0.2毫升，放入毛细管中，离心。在室温20℃、转速2000rpm，温度4℃的条件下离心，提取血清。2.1.2处死取材药物干预3周后，大鼠禁食不禁水12小时后，给予大鼠腹腔注射10%水合氯醛0.3mL/100g体质量，麻醉后打开腹腔，腹主动脉取血，分作2份，分别放入预先加入EDTA的EP管和空EP管制备血浆、血清；取血后立即摘取

7、左侧肾脏，称重后于冰上去掉包膜，纵向剖开，分别放入两个EP管中，液氮速冻后储存于-70℃冰箱备用。用化学比浊法测血糖、尿微量白蛋白，酶免法测血清VEGF、ATⅡ，血浆和尿液ET-1等实验指标浓度和ACE活性。2.2实验检测2.2.1一般情况每天对各组大鼠的活动情况、进食量、饮水量、尿量等一般情况进行观察，每天提供给大鼠足够的食物和水，每两天更换大鼠垫料一次，保持大鼠垫料处于干净和干燥状态。空白组大