饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用与蛋白质代谢反应的影响

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万方数据目录前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1HⅡ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．第一章不同添加形式的蛋氨酸对水产动物营养作用研究综述．21引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22蛋氨酸的营养作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．22．1蛋氨酸的生物学功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22．2蛋氨酸的免疫功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33几种不同添加形式的蛋氨酸⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33．1DL．蛋氨酸及其钠盐⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一33．2蛋氨酸的衍生物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33．3包埋蛋氨酸⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．33．4聚蛋氨酸⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．44鱼类蛋氨酸最适需要量的研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45不同添加形式的蛋氨酸在水产动物饲料中的应用⋯⋯⋯．．55．1晶体蛋氨酸在水产饲料中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯55．2蛋氨酸衍生物在水产饲料中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．55．3包膜蛋氨酸在水产饲料中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．65．4聚蛋氨酸在水产饲料中的应用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．66结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7第二章饲料中添加寡聚蛋氨酸或晶体蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．81引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯82材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。9 万方数据2．1实验设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．2实验鱼及饲养管理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．3样品收集和分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯92．4计算及统计方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1O3结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯103．1饲料中添加寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、存活和体组分的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．103．2饲料中添加寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼饲料利用的影响⋯⋯一113．3饲料中添加寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼肝体比、脏体比和肥满度的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯114{寸论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯115结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12附表和图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。13第三章饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．191引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．192材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．192．1实验设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．192．2实验鱼及饲养管理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．202．3样品收集和分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．20样品的收集和分析方法同第二章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．202．4计算及统计方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯203结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯213．1饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、存活和体组 万方数据分的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．213．2饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼饲料利用的影响213．3饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼肝体比、脏体比和肥满度的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．224讨论．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．。⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯。⋯⋯．225结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23附表和图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24第四章饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼蛋白质反应的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．291引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．1实验设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一292．2实验鱼及饲养管理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．292．3样品收集和分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．302．4统计方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯303结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯303．1饲料中添加几种不同形式的蛋氨酸对大黄鱼肝脏谷丙转氨酶和肝脏谷草转氨酶的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．303．2饲料中添加几种不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．303．3饲料中添加几种不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼血氨、尿素氮的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯314讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．315结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32 万方数据附表和图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．36致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。45个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。46 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响．1^—J‘月|j吾大黄鱼(Larimichthyscrocea)属鲈形目(Perciformes)，石首鱼科(Sciaenidae)，黄鱼属(Larimichthys)，其营养价值高、肉质鲜美，为我国主要海洋经济鱼类之一。近些年由于种质资源的破坏，养殖大黄鱼越来越受到重视。但是，随着鱼粉价格的提升，水产饲料鱼粉成本提高。因此，寻求一种新型的廉价蛋白源已成为亟待解决的关键问题。植物蛋白源价格低廉，供应稳定，为鱼粉的主要替代蛋白源。但是植物蛋白源替代鱼粉必然造成氨基酸的不平衡，尤其缺乏蛋氨酸，这在一定程度上影响了植物蛋白源替代鱼粉的作用效果。为弥补氨基酸的不足，必须在植物替代鱼粉饲料中补充外源氨基酸。目前在水产饲料中应用最广泛的为晶体蛋氨酸(Yuan等，2011)。研究表明晶体氨基酸在鱼类中可以被较好的利用，弥补饲料中氨基酸的不平衡(Espe和Lied，1994；Rodehutscord，1995；Williams等，2001；Roilin等，2003；Espe等，2006)。但是也有研究表明晶体氨基酸作用效果不佳，低于结合态氨基酸(Espe和yjaa，1991：Schuhmacher和Gropp，1997；Zarate和Lovell，1997；Refstie等，2001；Liu等，2002；Dabrowski等，2003；Peres和Oliva．Teles2005；)。这可能是由于晶体氨基酸与结合态氨基酸相比溶失率高，吸收不同步。因此，寻求高效的蛋氨酸添加途径成为了亟待解决的问题。包膜蛋氨酸是对晶体氨基酸进行包膜处理，可以降低晶体氨基酸吸收速率和在水中的溶失率。氨基酸寡聚物的合成已经进行了多年的研究(Schwab等，2012)。这种合成的蛋氨酸寡肽(OMet)在小鼠的研究中表明具有较高的生物活性(Chiji等，1990；Hara和Kiriyama，1991；Kasai等，1996)。蛋氨酸寡肽的生物活性和利用效果也在鱼类实验中进行过研究(Masumo等，1999)。但是目前还没有酶法合成的蛋氦酸寡肽在大黄鱼饲料中的研究。这种合成的蛋氨酸寡肽以聚合体的形式存在，难溶于水，具有替代外源晶体蛋氨酸潜力。蛋氨酸羟基类似物在结构上与蛋氨酸不同，其分子中一氨基被一羟基取代。蛋氨酸羟基类似物在动物体内需转化为蛋氨酸之后才能被机体吸收利用，关于蛋氨酸羟基类似物的应用一直存在争议。因此，比较晶体蛋氦酸、蛋氨酸寡肽、羟基蛋氨酸类似物和包膜蛋氨酸在富含植物蛋白源饲料中对于对大黄鱼生长和饲料利用的影响具有重大意义。马俊2015年3月于青岛1 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响第一章不同添加形式的蛋氨酸对水产动物营养作用研究综述1引言鱼粉是水产饲料工业最为重要的蛋白源，近年来，随着海洋环境的污染，种质资源的短缺，鱼粉价格日益攀升，直接导致了水产饲料成本的升高。因此，人们越来越重视其它动植物蛋白源的开发。与优质的鱼粉蛋白源相比，动植物蛋白源通常表现为某些必需氨基酸的缺乏或者是不足，尤其缺乏蛋氨酸和赖氨酸。蛋氨酸被誉为“生命性氨基酸”，参与水产动物体内多种反应，为鱼类生长所必须。为弥补蛋氨酸的缺乏，目前，通常采用在水产饲料中添加外源晶体蛋氨酸的方法。但是晶体氨基酸在鱼虾饲料的使用中又存在很多问题，例如溶失率较高，相比结合态的氨基酸吸收不同步，改变饲料酸碱度等。因此如何提高蛋氨酸的利用率己成为研究的热点问题。目前，关于外源蛋氨酸对水产动物生长和饲料利用的研究已有很多，从晶体蛋氨酸，到蛋氨酸羟基类似物，包埋蛋氨酸，寡聚蛋氨酸等，这些研究旨在探寻最适的蛋氨酸添加形式和添加量，提高外源蛋氨酸的利用率，降低饲料成本。本文总结了以往研究当中，各种不同添加形式的蛋氨酸对水产动物的营养作用，从而为进一步的研究提供依据。2蛋氨酸的营养作用2．1蛋氨酸的生物学功能蛋氨酸作为“生命氨基酸”，其生物学功能包括很多方面，它可参与动物体内80多种生化过程。蛋氨酸参加机体蛋白质的合成，是蛋白质合成中的起始氨基酸。另外，蛋氨酸为磷脂合成、氨基酸代谢、RNA和DNA合成等一系列生化反应提供甲基。动物代谢过程中许多物质。蛋氨酸的营养功能主要有：(1)参与蛋白质合成，在动物体内可转化为胱氨酸，为蛋白质合成提供蛋氨酸和胱氨酸(2)蛋氨酸具有供甲基作用，可产生活性甲基，用来合成角质素、胆碱和核酸等甲基化物质。(3)蛋氨酸的中间代谢产物半胱氨酸可直接或间接参与动物体内多种活性物质的合成。(4)促进动物生长和细胞增殖等功能。 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响2．2蛋氨酸的免疫功能已有研究表明，蛋氨酸具有免疫功能。Spunt等(1984)研究表明，小鼠在蛋氨酸缺乏的情况下，其对猪流感病毒的易感性增加。Hill(1986)等研究表明，淋巴细胞对蛋氨酸的需要量比骨骼肌细胞要高。Tsiagbe等(1987)发现，饲喂蛋氨酸缺乏的饲料时，雏鸡对SRBC和植物凝集素(PHA)的迟发型超敏反应均降低。帅柯等(2006)研究表明添加合成蛋氨酸能极显著提高攻毒后幼建鲤第17天成活率、头肾、后肾和脾脏重量、攻毒前后血液红、白细胞数量、攻毒后白细胞吞噬率、攻毒后第17天血清中溶菌酶含量、抗嗜水气单胞菌抗体效价、血清凝集素水平、酸性磷酸酶活力和血清补体C。含量。另外，肖伟伟(2010)在幼建鲤的研究中也有相似报道。3几种不同添加形式的蛋氨酸3．1DL．蛋氨酸及其钠盐目前，DL．蛋氨酸及其钠盐在水产饲料中的应用最为广泛。蛋氨酸分为L．蛋氨酸和D．蛋氨酸，L一蛋氨酸在动物体内可以被直接吸收利用，D一蛋氨酸必须经过酶催化转化为L一蛋氨酸才能被利用。关于DL一蛋氨酸的生物学效应目前己经较多研究。3．2蛋氨酸的衍生物蛋氨酸衍生物主要包括液态羟基氨酸(MHA)、蛋氨酸羟基类似物及其钙盐等。在我国，蛋氨酸的生产技术还未娴熟，很大一部分蛋氨酸仍需进口。羟基蛋氨酸等衍生物与晶体蛋氨酸相比，生产成本低，从而备受关注，其生物学效价一直是近年来研究的热点，羟基蛋氨酸等衍生物的生物学效价受水产动物的种类、日龄与大小、养殖环境等因素的影响而略有差异。3．3包埋蛋氨酸有研究表明DL一蛋氨酸可以通过物理化学的方法，用特殊的包被材料包埋起来， 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响以减少蛋氨酸在水中的溶失，减缓蛋氨酸被吸收利用的速率。目前，对氨基酸进行包被的壁材包括(1)糖类：邻苯二甲酸醋酸纤维素(CAP)(Deng等，2006；Segovia．Quimero和Reigh，2004)、羧甲基纤维素(CMC)(Alam等，2004)、角叉菜胶(Alam等，2004)、环糊精(陈丙爱等，2008、淀粉等；(2)蛋白质类：琼脂、玉米蛋白、酪蛋白一明胶(Alam等，2004)等；(3)脂类：丙烯酸树脂(郭玉琴，2006)、棕榈酸三酰甘油酯(TPA)(刘永坚等，1999；Segovia-Quintero和Reigh，2004)、硬化油脂(王冠等，2006)等。不同的包被材料，不同的生产工艺都会造成包埋蛋氨酸的缓释效果的差异，因此还需进一步研究。3．4聚蛋氨酸聚蛋氨酸是指利用化学合成法或酶催化法等由蛋氨酸单体聚合而成的寡肽或多肽。聚蛋氨酸具有难溶于水的特点，并且随着肽链的延长，其被水产动物水解，吸收利用的时间也将延缓。目前，蛋氨酸的聚合工艺并不完善，成本较高，聚蛋氨酸在水产饲料当中的应用的研究鲜有报道。4鱼类蛋氨酸最适需要量的研究目前，关于水产动物蛋氨酸最适需要量的研究较多，影响鱼类蛋氨酸需要量的因素很多，水产动物因种类、大小、饲料成分、养殖条件、投喂方式不同，对蛋氨酸的需求量亦有差异。总体研究表明水产动物对蛋氨酸的需求量大致为1．33％～4．5％(占饲料蛋白的比例)。周贤君等(2005)研究表明异育银鲫(Carassiusauratusgibelio)总含硫氨基酸的需求量为1．11％(其中胱氨酸含量为0．42％)，占饲料蛋白的2．71％。魏玉婷(2010)研究结果显示，大菱鲆(Scophthalmusmaximus)幼鱼蛋氨酸的适宜需求量为1．61％饲料干重(3．39％饲料蛋白，以特定生长率为评价指标)；陈乃松等(2010)研究表明当饲料中的胱氨酸占饲料蛋白质的0．68％时，大ISI黑鲈(Micropterussalmoniodes)对饲料中蛋氨酸的最适需求量为1．22％，占饲料蛋白质的2．75％。KangsenMai等(2005)在大黄鱼(Larmichthyscrocea)幼鱼的研究中表明，大黄鱼幼鱼的蛋氨酸最适需求量分别为1．44％和1．39％(占饲料蛋白质的3．34％和3．32％)。杜强等(2012)卵形鲳鲣(Trachinotusovatus)对含硫氨基酸(蛋氨酸和胱氨酸)最适需要量为1．48％，占饲料蛋白质的3．44％。4 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响5不同添加形式的蛋氨酸在水产动物饲料中的应用5．1晶体蛋氨酸在水产饲料中的应用目前，对于饲料中蛋氨酸的缺乏，主要采用添加外源晶体蛋氨酸的方式弥补，关于晶体蛋氨酸在水产饲料中应用的研究也较多。张满隆等(2002)通过在鲤鱼(Cyprinuscarpio)配合饲料中添加0．2％的蛋氨酸可以提高鲤鱼的生长速度，降低饲料系数，饲料成本每千克可降低8．5％。陈涛等(2010)研究发现在豆粕型饲料中添加蛋氨酸可显著提高江黄颡鱼(PseudobagrusvacheHi)的增长率，但不影响饲料系数；然而关于水产动物对晶体蛋氨酸的利用效果一直存在争议，例如冷向军(2005)在异育银鲫的研究中发现，在蛋氨酸缺乏的饲料中补充O．1％的晶体蛋氨酸，异育银鲫的生长无明显提高。5．2蛋氨酸衍生物在水产饲料中的应用蛋氨酸衍生物在养殖动物中的应用是近年来研究的热点，关于其生物学效价一直存在争议。研究表明在饲料当中添加HMTBa相比与添加晶体蛋氨酸处理组，大菱鲆有较高的蛋白质效率和蛋白质沉积率(侯华鹏，2012)，说明大菱鲆也能和晶体氨基酸一样有效的利用HMTBa，获得更好的生长。但是大菱鲆摄食后血浆中HMTBa的含量并没有期望的那么高。研究表明在替代50％的鱼粉饲料中添加0．165％的HMTBa可以显著增加虹鳟(Oncorhynchusmykiss)的蛋白质和磷在体内的沉积，提高体增重和饲料转化率(Cheng，2003)。实验表明在饲料当中添加MHA，大豆浓缩蛋白可以完全替代鱼粉，在增加投喂频率的条件下而不引起罗非鱼(Oreochromisspp)的生长性能的下降(Zhao，2010)。Li等(2009)研究表明在氨基酸缺乏的饲料当中添加MHA不仅可以和DL—Met一样增加条纹鲈(Moronesaxatilis)的体增重、存活率、饲料转化效率、蛋白质效率、蛋白质转化效率和体蛋白含量，而且还可以增加血液当中抗坏血酸的浓度、降低肝脏中硫代巴比妥酸反应活性物质的浓度，缓解鱼类因为蛋氨酸缺乏而引起的一些氧化损伤。但也有的研究表明，MHA并不能完全替代晶体蛋氨酸。例如，在斑点叉尾鲴(1ctaluruspunctatus)饲料中添加MHA的生物学效价为L．蛋氨酸的26％(Robinson，1978)；迟淑艳(2009)在饲料当中添加MHA，以凡纳滨对虾(Penaeusvannamei)的气 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响增重率为参考其效价相当于L．Met的68％；MHA添加到杂交鲈鱼(MoronechrysopsMSaxatilis)的饲料中，其生物学效价为L—Met的75％(Keembiyehetty，1995)。5．3包膜蛋氨酸在水产饲料中的应用微胶囊化对晶体氨基酸有一定的缓释作用，不仅使溶失率降低，可也缓解添加的氨基酸与蛋白质结合态的氨基酸吸收不同步的问题，提高蛋白质的利用效率。但是需要进一步优化氨基酸的微胶囊的包被材料及包被工艺，进一步改善氨基酸的利用效率。冷向军等(2005)研究在低蛋氨酸饲料中添加晶体氨基酸，异育银鲫的生长无明显提高。但环糊精包膜或淀粉包膜氨基酸组鱼体增重率提高了20．5％、19．7％，饲料系数下降了O．40、0．39，与晶体氨基酸相比，包埋氨基酸延迟了血清游离氨基酸的吸收峰值出现的时间，减缓了氨基酸的吸收利用，提高了蛋白质合成效率。刘永坚在2002年研究发现，实用饲料补充包膜赖氨酸与不补充或补充结晶赖氨酸的处理组比较，增重率增加、蛋白质效率提高、血清必需氨基酸平衡指数(EAAP)改善、蛋白质合成率提高，此实验表明饲料中添加包膜赖氨酸，是补充饲料蛋白质的一种很好的方式。王冠等(2006)研究发现，与晶体氨基酸相比，包膜氨基酸在水中溶失率显著降低，显著提高了异育银鲫的生长，降低了饵料系数。迟淑艳(2009)表明RES微胶囊蛋氨酸可以降低蛋氨酸在水中的溶失率，在蛋氨酸的吸收过程中具有缓释的作用，提高了蛋氨酸的利用率，促进了凡纳冰对虾的生长，提高了对虾体内蛋白质和氨基酸的含量。5．4聚蛋氨酸在水产饲料中的应用小肽能够完整的进入血液循环，可以提高的蛋白质合成效率。在家畜和哺乳动物，己经有很多研究表明在饲料当中添加寡肽可以提高的动物的生长性能和饲料利用效率。在水产动物中，近年来对海鲈鱼(Lateolabraxjaponicus)(Infante，1997)、大黄鱼(李文杰，2013)、半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)(张珊，2013)、大菱鲆(谷珉，2013)、鲤鱼(李清，2004)、牙鲆(雷光高等，2008)、史氏鲟鱼(Acipenserschrenck)(邓岳松，2004)、异育银鲫(刘波等，2006)、欧鳗(Anguillaanguilla)(王碧莲等，2001)、幼龄建鲤(Cyprinuscarpiovar)(甘晖，2006)、南美白对虾(林启存，2010)等水产动物的研究表明：在一定范围内能提高水产动物的消化酶酶活力，促进机体的消化吸收。还表明饲料中添加小肽对水产动物有一定的诱食作用， 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响不同氨基酸的序列的小肽可以使机体产生不同风味的小肽，可以改善饲料风味，促进鱼类摄食，提高其生长性能(邓岳松，2004)。同时寡肽也能提高水产动物的免疫力，提高其存活率。饲料中添加2％～3％的小肽替代鱼粉能提高异育银鲫的消化酶活力和免疫能力(刘波等，2006)。小肽还可以能够加强体内有益菌群的繁殖，刺激免疫器官的发育，增强水产动物的免疫力(甘晖，2006)；提高矿物营养元素的吸收。有关酶的合成反应有很多报道，但是，仅有很少人报道和出版关于酶催化的聚酯反应，直到最近才得到很好的研究(Schwab，2012)。其中对寡聚蛋氨酸应用的比较少，这种用木瓜蛋白酶合成的寡肽在小鼠实验中具有较高的生物活(Chiji等，1990；Kasai等，1996)，同时也有研究表明该寡肽在鱼类上也有生物活性(Ganapathy，1981)。谷珉(2013)研究表明当豆粕替代水平达到60％时，添加蛋氨酸寡肽组凡纳滨对虾体增重与高鱼粉组不存在显著差异并且添加0．1％的蛋氨酸寡肽组显著提高了饲料效率和蛋白质效率；且与添加晶体氨基酸相比降低了肝体比，减缓了可能由于蛋氨酸代谢紊乱所引起的肝体比升高；由于蛋氨酸寡肽具有不溶于水的特点，能显著降低了蛋氨酸在水中的溶失率在该实验中也得到了证实。对大菱鲆的实验当中(谷珉，2013)，添加寡聚蛋氨酸处理组也提高了鱼的生长性能和饲料效率，同时观察添加不同形式的蛋氨酸对餐后血清游离氨基酸的变化，添加0．5％寡聚蛋氨酸处理组的血清蛋氨酸水平在9h达到高峰，12h开始下降，相比晶体蛋氨酸处理组延后了3h，缓解了与蛋白结合态的氨基酸吸收不同步的矛盾。6结论总体看来，晶体氨基酸在水产动物中的添加效果与饲料配方、动物的种类、动物的摄食习性、动物的年龄、生理状态、投喂频率等因素有关，因此添加晶体氨基酸的效果会有所不同。针对晶体蛋氨酸出现的问题，我们可以通过提高投喂频率、用包膜蛋氨酸、蛋氨酸衍生物、蛋氨酸寡肽等替代晶体蛋氨酸等方法提高蛋氨酸的利用效果，提高水产动物的生产性能和饲料转化效率。此外，在今后的研究当中，我们应进一步加强对同位素的应用，以便更好的研究氨基酸的代谢的去处及代谢的速度，对氨基酸的不同添加形式进行明确的对比；同时也要加大对小肽在水产动物中的应用及推广，特别是在植物性蛋白源替代鱼粉当中添加蛋氨酸寡肽，提高氨基酸在水产动物的利用效率。7 饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响第二章饲料中添加寡聚蛋氨酸或晶体蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用的影响1引言大黄鱼(Larimichthyscrocea)属鲈形目(凡地iformes)，石首鱼科(Sciaenidae)，黄鱼属(Larimichthys)，是我国传统“四大海产”之一，其肉质鲜美，为我国近海主要经济鱼类。目前，大黄鱼养殖主要为传统的网箱养殖，大黄鱼网箱养殖养成阶段的饲料一般以冰冻鲜杂鱼为主，或辅以配合饲料。鲜杂鱼饵料极易流失，不仅导致饲料系数过高，而且会引起海洋水环境的污染，诱发病害。颗粒配合饲料之所以不能普及到大黄鱼的养殖中，其主要原因是随着鱼粉价格的攀升，饲料成本不断升高，导致养殖成本过高。因此，寻求廉价高效的替代蛋白源已成为大黄鱼养殖亟待解决的问题。如何用植物蛋白替代鱼粉己成为我国饲料研究的热点。豆粕类与其它植物蛋白源zkq20160323相比，氨基酸组成较好，消化吸收率高(唐晓亮，2010)，资源丰富，价格合理。但与鱼粉相比，存在抗营养因子，适口性差，主要缺乏蛋氨酸和赖氨酸，从而限制了其广泛使用。目前，主要以添加外源晶体氨基酸的方式补充替代鱼粉饲料中缺失的氨基酸。目前普遍认为饲料中添加晶体氨基酸主要在鲑鳟鱼类中有效(Rodehutscord，2000；Yamamoto，2005)，而在斑点叉尾鲴和鲤鱼等的研究中结论并不一致(Robinson，1980；Robinson，1991；Viola，1991；Li，1998)。导致晶体氨基酸利用率低的原因主要是晶体氨基酸在水中易溶失(刘永坚，2002)，以及与饲料中结合态氨基酸的吸收利用不同步(冷向军，2007)。寡肽与晶体氨基酸相比，随着肽链的延长，其在水中的溶失率下降，延缓了消化吸收速率，从而有望替代晶体氨基酸成为一种新型的高效外源氨基酸源。目前，国内外对于寡肽在水产动物饲料应用方面的研究较少，且多集中在动植物蛋白水解肽上，本实验首次以酶法合成的寡聚蛋氨酸为大黄鱼幼鱼饲料的补充蛋氨酸源，比较豆粕替代鱼粉饲料中添加外源晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长和饲料利用情况的影响。万方数据 饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响2材料与方法2．1实验设计以鱼粉、豆粕为主要蛋白源，鱼油、豆油、大豆卵磷脂为主要脂肪源，配制7种等氮等脂的饲料，每个处理组3个重复。设计1个低鱼粉(31．8％)对照组(LF)。在LF的基础上分别添加0．35％、0．65％和0．95％的晶体蛋氨酸或蛋氨酸寡肽，配制其它6组饲料，并分别命名为CMet0．35、CMet0．65、CMet0．95、OMet0．35、OMet0．65和OMet0．95。饲料配方和常规成分分析见表2．1，饲料氨基酸组成分析见表2．2。根据专利技术制备蛋氨酸寡肽，专利号为ZL201110330500．8。晶体蛋氨酸购自国药集团药业股份有限公司，纯度为99．9％。由质谱测定蛋氨酸寡肽中不同聚合度肽的分子量(北京艾米诺医学有限公司)，结果表明，蛋氨酸寡肽为蛋氨酸2肽、3肽、4肽、5肽、6肽、7肽和8肽的混合物。在饲料的制作过程中，原料均粉碎后经80目过筛，按照饲料配方混合后加入鱼油、豆油和大豆卵磷脂揉匀，然后加入适量水混合均匀，用F(II)．26型双螺杆挤条机(华南理工大学，广州)加工成颗粒饲料(3mmx3mm)，最后用鼓风烘箱55℃zkq20160323烘干至水分含量10％以下，储存于．20℃冰箱中备用。2．2实验鱼及饲养管理养殖实验在宁波象山西沪港进行，实验用大黄鱼购自浙江省宁波市象山港湾水产苗种有限公司。正式实验前，所有大黄鱼均置于3．0mx3．0mx3．0m的网箱中暂养2周，然后挑选规格相同、体格健壮的大黄鱼随机分配到21个1．5mxl．5mx2．0m的网箱中进行养殖实验，每个网箱放养50尾。大黄鱼初始平均体重为26．0-J：1．69，每天分别于05：30和17：30饱食投喂1次。养殖周期为8周，养殖过程中的死鱼均计数并称重。养殖期间海水温度为24。C-31℃，盐度24960--29960，pH值7．1～7．4，溶解氧不低于6mg／L。2．3样品收集和分析正式养殖实验开始时，从实验鱼中随机挑选6尾置于．20℃冰箱中保存，用于全鱼体常规分析。养殖实验8周后，所有实验鱼饥饿24h，然后计数，称重。每个网箱随机取3尾鱼于．20冰箱中保存，用于全鱼体常规分析。每个网箱随机取3尾鱼测量体长、体重、肝重、内脏重，用于计算肥满度、肝体比(HSI)和脏体比(VSI)。每个网箱万方数据 饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响随机取8尾鱼进行尾静脉取血，其中6尾鱼取血后立即解剖取肝脏，保存于液氮中，用于肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)活力测定。血液在40C冰箱中静置12h后，3000r／min离心10min，得到的血清置于液氮中保存，用于血清中血氨、尿素氮含量的测定。全鱼和饲料中常规成分的测定采用AOAC‘的标准方法。血氨、尿素氮、肝脏GOT活力和GPT活力采用相应试剂盒(南京建成生物工程研究所)测定。大黄鱼饲料中的氨基酸组成采用日立L．8900型全自动氨基酸分析仪测定。2．4计算及统计方法特定生长率(SpecificGrowthRate，SGR，％／d)=100×(终末体重．初始体重)／天数存活率(Survivalrate，SR)(％)=lOOx终末实验鱼数量／初始实验鱼数量摄食率(Feedintake，FI)(％)=lOOx总摄食量／【(终末体重+初始体重)／2]／天数饲料系数(Feedconversionratio，FCR)(％)=摄食量／(终末体重．初始体重)蛋白质效率(Proteinefficiencyzkqratio，PER)(％)=lOOx(鱼体增重量／摄入蛋白)20160323肝体比(Hepatosomaticindex，HSI)(％)=(肝脏重量／终末体重)×100脏体比(Viscerosomaticindex，VSI)(％)=(内脏重量／终末体重)x100肥满度(Conditionfactor，CF)(％)=(终末体重／鱼体体长3)x100所得实验数据采用平均值±标准差表示，采用SPSSl7．0软件进行单因素方差分析(One．WayANOVA)，当差异显著时(P<0．05)，采用Tukey’S进行多重比较。3．1饲料中添加寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、存活和体组分的影响由表2．3可以看出，饲料中添加晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼的增重率有显著影响(P<0．05)。与低鱼粉组相比，饲料中添加晶体蛋氨酸和寡聚蛋氨酸增重率均明显提高，其中OMet0．95组最高，显著高于低鱼粉组(P<0．05)。另外，添加相同含量的蛋氨酸，寡聚蛋氨酸组大黄鱼增重率高于晶体蛋氨酸组，但差异不显著(P>0．05)。饲料中添加晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼的存活率没有显著影响(P>0．05)。经过8周的养殖实验，大黄鱼的体常规组成不受不同饲料处理的显著影响10万方数据 饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响(P>O．05)。其中，鱼体粗蛋白含量为15．60．16．60％，粗脂肪含量为7．70．8．30％，灰分含量为3．17．4．70％，水分含量为70．77—72．77％(见表2．4)。3．2饲料中添加寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼饲料利用的影响饲料中添加晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼的饲料系数和蛋白质效率有显著影响(P<0．05)(表2．3)。与低鱼粉对照组相比较，饲料中添加晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸均降低了大黄鱼的饲料系数，并且在OMetO．65和OMetO．95组的饲料系数显著低于低鱼粉对照组，而与高鱼粉对照组无显著差异。同样，与低鱼粉对照组相比较，饲料中添加晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸均升高了大黄鱼的蛋白质效率，并且在OMetO．65和OMetO．95组的蛋白质效率显著高于低鱼粉对照组(p0．05)。3．3饲料中添加寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼肝体比、脏体比和肥满度的影响OMetO．95组大黄鱼的肝体比显著低于低鱼粉对照组(尸<0．05)，其他各组之间的zkq20160323肝体比无显著差异(表2．5)。饲料中添加晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼的脏体比和肥满度没有显著影响(P>0．05)。4讨论实验结果表明，饲料中补充的外源蛋氨酸的种类和含量显著影响了大黄鱼幼鱼的生长和饲料利用情况。蛋氨酸是豆粕替代鱼粉饲料的主要限制性氨基酸，本研究中采用外源晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸补充低鱼粉饲料中缺失的蛋氨酸。实验结果表明，在LF组饲料基础上补充晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸大黄鱼幼鱼的增重率、饲料转化率和蛋白质效率均提高，并随着添加梯度的上升而增大。其中，OMetO．95组大黄鱼幼鱼的增重率、饲料转化率和蛋白质效率较低鱼粉组对照组(LF)均显著提高(p窭赠隧k蚺oo．Noo“oo．乙oo式oo“oo心oo．N～o耋H暑一plo旨罹时餐o．【．oo．【．oo．【．0o'【．oo．【．oo．【．oo'【．o苍智醐酶闷no．o价o．o价o．ono．ono．o价o．o价o．oII．【j口≯定od声。罹邻憋如蛾o_≈芑罡蔫o■．【on．Io■'【o■Ho■Hon．Io■H苗暑u甾酶随跫咯价C．o价9．o价口．o苗艺。氍腻眦磔嫌价C．o价D．on小．o苎一是Iv．1Q甾酶腥价岔．oo屿．oc．oooo．oo心．oC．oooo．o_xIIuQ＆∞pIo对。口一ur四甾醐酶如赠一Q．c一岔．c一心“n①’_一①．CH岔．c一岔“●辖求求餐葵So勺已。皿眦梨^装v口歪ojd寸小“寸卜N．n寸H“寸n寸⑦．寸寸nN“寸on“寸nN“寸 ．oNZ．寸o∞IIN‘sHIIo∞．【．IipI譬。一急IIInJU瓮IIo—Q2(I吕nIo一8．o岩p—I：【II—pIo苫“．-【一-【iioII—o≯一眦一Q口一砖_Qoo口四_Q母-__《．寸．s西寸∞。Q兰ooN‘80H．oNZ．N一寸。气王百u‘89ooNH．oNZ●寸o∽∞芝‘sg价寸．oN王．口o∽II笺‘89。n．oN}{．々o∽o山萌goH．oN}{，寸o∽声u‘8IIIon‘(摹H—N—uou‘s吕。婚基noH哥u醯g。N‘coo∽gZ：(苗一它∞_蜀g∞吕vxIg。Jd≮BII一芝“．∞卜寸．N'【．o∞o一墨一一ooo口一一一心-们．，口。o-o—dII一∞dIIooo寸．D吧一-o一矗ooII一一。二。一∞_IIoooN．它一。对。一qJoo∞时一M'【IIo寸N．一o-QI：【cIoQo_。对二cI一心‘宕吕n．一oJ盘一。一8。一。I；Iu‘暑gNn．o瓮苗譬一。II一苗h‘sg。心．II一芑一D‘s吕。N．pIu时。一一oJ‘sg。。N．pI譬II—u息II‘sg。心．pI譬。一口Q暑。专A‘sg。。∞。一。皇∞。II一一∞_II。H‘c√ru一_II对=>一∞_II。H忒一Mu[II—dII时=>一∞HII。N．一U}{．。II一)(。它一-入A一∞_II价寸．II一>时口。D一-一∞dII价N．口一_II≈一I{_¨^_D一它∞u《∞h。∞_IIv)(一HII。-AII—HII四_—>．N。心o．o．oII—o_∞Ao—nN．o．Q口一IIoo-专一．【n．ooII一一日>一oH．ooII—11日肖一≯口∞lQ一卜卜．oQ口一∞九一一H卜．o．o口一。jo一一寸n．o．Q口一Q；Q—o∞一一价H．o．o口一日口∞一工一寸N．H．o口一II一∞h∞．(价岔．o．n岣．o．nn．o一_QH20‘(价吼．o．价婚．o．nn．o一_D_2u‘(山一v一时o_II工∞蠕^c，o厂I一心价．oo口一∞h一一寸卜．o．o口一u；u一一Hn．o．o口一o；o—o∞一一．【寸．．【．oII—II一∞急．(山Z。∞_o一日一时odIIII∞蠕‘8Iu。∞．蝼斟甾鹾‘暑goH．幂甾挺长旧。寸N．衄一∞吕o-【∞o．o．Q口一u_∞Ao—oN．o．Q口一IIoo皇_一寸N．ooII一一时≯一∞N．ouII—II母一时一≯口QI：【cI矗比一王一^pu一乜摹v)(一^IIo-cI∞它一o∞oa—d11日一母一_IID∞∞幽．H¨∞Q_oZI．Ii甾唧恤I．Ii甾娠扭。妪氍窿；儆糟蕊“。髻眯箍当怅邻憋寻。∞岔寸．8．枭恕爨一∞oH．$蛹¨甾篷面暑ooNH．搭甾褥‘暑IlI导．蟮甾鹾‘暑gon．姑甾挂‘sgon．^装-【v姆甚螺一∞uIo∞．$甾器¨∞goN零甾鼹目^葵S蛩／暑g∞IIIvS如赠捌暴隈．co暑等．乙I。帐媒士，咯暴一∞gooo寸．髻型甚壤‘嚣goooN．u帐州媒．嚣g帐州媒‘嚣吕价‘cQ帐州媒‘暑gNn《帐州媒‘嚣g‘c澎帐州媒‘sg。．【二一∞懈州媒‘s吕。N‘9∞懈州媒。心．艇霎州．89oN．甾古∞吕ooN．氍要¨∞1IIo∞．蟮甾蚪‘嚣吕oo∞．枯墨‘sg导．懈枢蜒‘8III价N二∞帐州媒¨柔回堂／暑Jo∞吕vS如熙帐州媒心。心o．o甾酶卷*卉N．o甾蛹椽¨HC．o甾蛹爨‘oI．o甾酶幢将心卜。氍蛹饕‘I卜．。甾酶根‘IC．。甾娠根呔ⅨI．o甾酶黑一葛．I氍酶桀套△《价∞．o‘价C．。一苗苫。蒜吼．o‘价心．o‘按．o)苗茏u岔1)熹集删警‘90．0甾酶墨汁‘oN．o甾酶抵¨葛．o甾]季爨‘8N．o氍酶瞌将‘9■o甾腻饕¨芝．o甾酶恨¨葛．o甾腻垛呔‘I寸．'【甾蝻桨．(山墨v黑删恒。^宴S摹v甾醐豚如赆．I。燃aH．oHN．0∞H．oHN．o∞'【．0oN．o昏H．oN卜H卜∞．乙寸n．CHN寸on∞“仓岬nHN一．一Ho．C卜寸￡In卜Hnn．nn寸．c'【∞∞式寸N．CHCI．C卜寸．nH∞卜oHN．CN寸．CH^装vu口一Q苗分甾蜒墨*^摹vo口一口。一专og链蹶啪^装vQ暑董og求长^装v它一口一一。勺已。餐皿f『桑唇醯g迓呕拳芒蟋皿咖嗡旺熏婪S，半州删泰删椒K茛甾酶哪g韬淤匣佟最蜂七b亲匠万方数据 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响表2—2实验饲料氨基酸组成分析(％，干重)Tab．2-2Aminoacidcompositionofdiets(巴名，drymatter)注：采用日立L．8900氨基酸分析仪检测氨基酸Note：TheaminoacidswereanalyzedbyAminoAcidAutomaticAnalyzer(L一8900Hitachi—hitech，Japan) ．【no．oveQQ口Q．1m薯Ip兰8uIc甚∞熹og∞矗#Q一一一对g∞它Q苞一8∞矗Qns菪o-脚器Ip暑一≥ag三oQQg舞。暑oIS等一日>U苦乙。^no．ovd)郴吲昧梢瞒群匣k时蚪蠖叫仁b累i匣。燃c【∞o．o刊N●HDn一．o刊卜n．HD时岔一．o书∞N．一D对∞o．o刊N寸．HD爵吼o．o州△o．一D三N．o刊卜N．一对乙I．o州一∞．o砖No．o书NN．I矗@o．o刊一N．一D时价一．o书卜n．一D时∞o．o刊oC．一cI对卜一．o刊心婚．一。日∞o．0刊n寸．IDn一．o州n∞．ID@岔．IN书∞∞．卜cIcrB∞△．8书∞价式N—D时n心．卜N卅nN．卜△D时n婚．nN刊n卜．心一一D矗。价．on州寸价．寸岔D≈o∞文N刊心N式⑦对∞一．8一州∞n．一卜装盈∞∞装壶U皿摹盈o≥褂狡蟋Ⅲ随藕帐葵S斛恻磬心o．0书卜心．9∞寸o．o州nn．n卜价o．o卅卜心．寸卜价o．o州nn．n∞oH．o州oo．9noN．o刊卜心．0婚心o．o刊nn．n卜装盈∽声on．n刊价∞．．【婚c1日nn．N州卜∞．卜ncI砖nH．寸书∞N．HncI对n∞．n刊nn．心nD日∞n．寸书∞价．o价cI矗N寸．n州岔岔．岔寸对n卜．N刊小n．寸寸M＼芝r∞‰o心．I圳60．9No心．一书oo．∞No心．H刊oo．9No∞．一书oo．9NoD．I州oo．9No心．H州oo．9No心．一刊oo．9Ng|／嗲∞H褂烬忙恻螳长效悯蛙段屦n吼．o苍窆on均-o苗苫。价C．o芯鼍、Ion岔．o苗掣zUnD．o苗_二Unn．o苗q、IU皿广I∞苗一Q鼎剐《写i盆：盆．s刊的葺矗。暑．)叻oIl葺o≯暑一^毽3一§．，u至§避盘-窭‘毽8．Io)I爵o．Iu亭o=o务owk矗一-o昌。一_爵NII一-昌々00口置矗ou皇矗—皇．10J．IQ盘Il_≥，o-Mo二-盎oo置一葺。一II_o—皇．owIIo．Ioo皇一目。一二_o—葺。葺II一矗-的誊u誊爵_o一弓-o-up葛阔n．N．盆矗一蜃醯譬旺熏龚S冥涩魈半州删枢K茛豁腻啪舔艨镫程蝻嘟簟咄曩蜂导柔Sn文僻兽醯g毯呕謦芒蟋皿嘲越旺熏柔S，半划删S删枢K莨篚城趟g幅龄匣k晨烽导葵S万方数据 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响表2-4饲料中添加晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼体组成的影响(％，湿重)(means±S．D．，n=3)Tab．2-4Effectsofdietarycrystallinemethionineoroligo-methionineonthebodycompositionoflargeyellowcroaker(Larmichthyscrocea)juveniles(％，wetweight)(means±S．D．，n=3)注：同一列中上标字母不同表示差异显著(p<0．05)。Note：Valuesinthesamecolumnwithdifferentsuperscriptedsmalllettersmeansignificantdifference(p<0．05)． 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响表2．5饲料中添加晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼肝体比、脏体比和肥满度的影响(means±S．D．，n=3)Tab．2-5Effectsofdietarycrystallinemethionineoroligo-methionineonHSI，VSIandCFofargeyellowcroaker(Larmichthyscrocea)juveniles(means±S．D．，n=3)注：同一列中上标字母不同表示差异显著(p<0．05)。Note：Valuesinthesamecolumnwithdifferentsuperscriptedsmalllettersmeansignificantdifference(p<0．05)． 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响第三章饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用的影响1引言近年来，如何用廉价的植物蛋白源替代鱼粉蛋白源一直是水产饲料方面研究的焦点。豆粕与其它植物蛋白源相比，成本低，蛋白质含量高，消化率高，从而被广泛应用。但是，与优质的鱼粉蛋白源相比，豆粕饲料氨基酸不平衡，存在抗营养因子。与鱼粉相比，豆粕饲料缺乏的氨基酸主要是蛋氨酸和赖氨酸。因此向饲料中添加晶体氨基酸成为解决这一问题的有效途径。但是晶体氨基酸在鱼虾饲料的使用中又存在很多问题，例如较高的溶失率，相比结合态的氨基酸吸收不同步，改变饲料酸碱度等等。目前，关于外源蛋氨酸对水产动物生长和饲料利用的研究已有很多，也做了一些关于不同蛋氨酸添加形式对水产动物生长影响的比较研究(王冠，2006；迟淑艳，2009；牛化欣，2009；杨志强，2011；侯华鹏，2012等)，这些研究旨在探寻最适的蛋氨酸添加形式和添加量，提高外源蛋氨酸的利用率，降低饲料成本，但是目前还没有研究系统的比较晶体蛋氨酸、蛋氨酸羟基类似物、包埋蛋氨酸、寡聚蛋氨酸对大黄鱼生长和饲料利用的影响。在第二章的研究中已经证实了饲料中补充寡聚蛋氨酸对大黄鱼生长和饲料利用有良好的促进作用，基于以上研究设计此实验，进一步全面的比较晶体蛋氨酸、蛋氨酸羟基类似物、包埋蛋氨酸、寡聚蛋氨酸对大黄鱼生长和饲料利用的作用，需求一种高效的补充外源蛋氨酸的途径，从而提高大黄鱼对豆粕饲料的利用，降低饲料成本，提高经济效益。2材料与方法2．1实验设计以鱼粉、豆粕为主要蛋白源，鱼油、豆油、大豆卵磷脂为主要脂肪源，配19 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响制10组等氮等脂的饲料，每个处理组3个重复(饲料配方见表3-1)。实验设计一个高鱼粉对照组(HF，鱼粉含量为53％)和一个利用豆粕替代HF组中40％鱼粉的低鱼粉对照组(LF，鱼粉含量为31．8％)。其它处理组饲料在低鱼粉对照组的基础上分别添加0．25％或0．75％的晶体蛋氨酸，寡聚蛋氨酸，蛋氨酸羟基类似物HMTBa和包埋蛋氨酸，分别表示为CMet0．25，CMetO．75；OMet0．25，OMet0．75；HMTBa0．25，HMTBa0．75；CoMetO．25，CoMet0．75。寡聚蛋氨酸为酶法合成。2．2实验鱼及饲养管理养殖实验在福建省宁德市大湾海区进行，实验用大黄鱼购自福建省宁德市富发水产养殖公司。正式实验前，所有大黄鱼均置于4．0×8．0×4．0m的网箱中暂养2周，然后挑选规格相同、体格健壮的大黄鱼随机分配到30个2．0×2．0×2．0m的网箱中进行养殖实验，每个网箱放养60尾。大黄鱼初始平均体重为8．0±0．79，每天于05：30和17：30饱食投喂2次。养殖周期为8周，养殖过程中的死鱼均计数并称重。养殖期间海水水温为实验期间水温为27．5""32．0*C，盐度为27"29，溶氧含量在7mg／L以上。2．3样品收集和分析样品的收集和分析方法同第二章2．4计算及统计方法增重率(Weightgainrate，WGR)(％)=lOOX(终末体重一初始体重)／初始体重存活率(Survivalrate，SR)(％)=100×终末实验鱼数量／初始实验鱼数量饲料效率(Feedefficiency，FE)(％)=100×(终末体重一初始体重)／摄食量蛋白质效率(Proteinefficiencyratio，PER)(％)=100×(鱼体增重量／摄入蛋白)肝体比(Hepatosomaticindex，HSI)(％)=100×(肝脏重量／终末体重)脏体比(Viscerosomaticindex，VSI)(％)=100×(内脏重量／终末体重) 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响肥满度(Conditionfactor，CF)(％)=100×(终末体重／鱼体体长3)所得实验数据采用平均值±标准差表示，采用SPSSl7．0分析软件进行单因素方差分析(One．WayANOVA)，当差异显著时(p包埋蛋氨酸>晶体蛋氨酸>蛋氨酸羟基类似物，但差异不显著(p>0．05)；饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼的存活率没有显著影响(p>0．05)，存活率最高的出现在OMetO．25组；由表3．3可以看出，饲料中添加晶体蛋氨酸或寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼鱼体的粗蛋白、粗脂肪和灰分没有显著影响(p>0．05)。3．2饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼饲料利用的影响由表3．2可以看出，饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼的饲效率和蛋白质效率有显著影响(p<0．05)。饲料中添加体蛋氨酸组，寡聚蛋氨酸组，羟基蛋氨酸类似物组，包埋蛋氨酸组大黄鱼饲料转化率和蛋白质效率均高于低鱼粉组，其中其中OMet0．25组最高，饲料效率和蛋白质效率均显著高于LF组(p<0．05)。对比添加0．25％的蛋氨酸各组，大黄鱼饲料效率按由高到低依次为寡聚蛋氨酸>包埋蛋氨酸>晶体蛋氨酸>蛋氨酸羟基类似物，但差异不显著(p>0．05)。 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响3．3饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼肝体比、脏体比和肥满度的影响由表3-4可以看出，饲料中添加寡聚蛋氨酸显著降低了大黄鱼幼鱼的肝体比(pO．05)。4讨论实验结果表明，饲料中补充的外源蛋氨酸的种类显著影响了大黄鱼幼鱼的生长和饲料利用情况。对比高鱼粉对照组(HF)和低鱼粉对照组(LF)比较可以看出，豆粕替代40％的鱼粉，大黄鱼幼鱼的增重率和饲料效率明显下降。由大黄鱼幼鱼的摄食率可以看出，低鱼粉对照组较高鱼粉对照组大黄鱼幼鱼的摄食率并没有降低，反而升高。这说明豆粕替代鱼粉并没有引起饲料适口性的降低，氨基酸的不平衡可能是LF组生长性能下降的主要原因，低鱼粉组大黄鱼摄食率的升高可能是为了通过饲料的摄食补充氨基酸的不足。本研究中采用外源晶体蛋氨酸、寡聚蛋氨酸、蛋氨酸羟基类似物、包膜蛋氨酸补充低鱼粉饲料中缺失的蛋氨酸。实验结果表明，在LF组饲料基础上补充晶体蛋氨酸、寡聚蛋氨酸、蛋氨酸羟基类似物、包膜蛋氨酸，大黄鱼幼鱼的增重率、饲料效率和蛋白质效率均提高。对比添加0．25％的蛋氨酸各组，大黄鱼增重率和饲料效率按由高到低依次为寡聚蛋氨酸>包埋蛋氨酸>晶体蛋氨酸>蛋氨酸羟基类似物。这也表明了蛋氨酸在豆粕替代鱼粉饲料中的重要作用，已有研究表明，当水生动物鱼粉蛋白源被部分或完全替代时，补充外源蛋氨酸可提高蛋白质效率，促进生长(Mai，2006；迟淑艳，2009；牛化欣，2010)，这与本研究的结果一致。从研究结果可以看出，与晶体氨基酸相比，寡聚蛋氨酸和包膜蛋氨酸对大黄鱼幼鱼具有更好的促生长作用。添加相同含量的蛋氨酸，寡聚蛋氨酸组大黄鱼幼鱼的增重率、饲料效率、蛋白质效率均高于晶体蛋氨酸组。这可能主要是由于晶体蛋氨酸可能会被过早的吸收和利用，从而导致与饲料中其它氨基酸吸22 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响收和利用不同步，降低了晶体蛋氨酸的利用率(Cowey，1988；Yamada，1981；Kaushik，1983：Murai，1987：Tantikitti，1995；Zarate，1999)。而与晶体蛋氨酸相比，寡聚蛋氨酸和包埋蛋氨酸的消化吸收速率降低。其中，包埋蛋氨酸由于存在包被材料，从而在消化吸收的过程中具有缓释作用(刘永坚，2002；冷向军，2007)。而寡聚蛋氨酸由于为多个蛋氨酸单体聚合而成，其被分解，吸收的速率较晶体蛋氨酸明显下降(谷珉，2013)。寡聚蛋氨酸和包埋蛋氨酸均可以更好的解决蛋白质合成代谢过程中蛋氨酸与其它氨基酸不同步的问题。另外，饲料中添加寡聚蛋氨酸对大黄鱼幼鱼的肝体比有显著影响。硫的代谢主要发生在肝脏组织(Mato，1997)。Espe等(2008)指出大西洋鲑每天摄入有O．05．0．069似乎可以保障良好的肝脏高甲基化能力，从而避免肝脏的增大。Chiji等(1990)的研究表明，与添加晶体蛋氨酸相比，在老鼠饲料中添加寡聚蛋氨酸可以显著降低老鼠肝脏脂肪沉积。本研究显示，寡聚蛋氨酸组Omet0．25大黄鱼幼鱼的肝体比较低鱼粉对照组(LF)显著降低(p<0．05)，同时也低于添加相同含量的晶体蛋氨酸组、包埋蛋氨酸组和蛋氨酸羟基类似物组。同时，Omet0．25组大黄鱼幼鱼的存活率最高，这也说明了寡聚蛋氨酸跟其它添加形式的蛋氨酸相比，除了具有促进生长的作用外，还可以保持大黄鱼肝脏活力，提高存活率。5结论综上所述，寡聚蛋氨酸较晶体蛋氨酸可以更好的提高饲料转化率，蛋白质效率，降低肝体比，从而促进大黄鱼幼鱼的生长。目前关于寡聚蛋氨酸在水产动物中应用的研究较少，本实验证实了寡聚蛋氨酸在大黄鱼饲料的中具有良好的应用效果，相信随着寡聚蛋氨酸生物学效应的进一步研究以及其合成工艺的优化，寡聚蛋氨酸将有望替代晶体蛋氨酸成为新型的高效外源蛋氨酸源。 n卜oo价．Ino．oo一．0oo式。价．乙n⑦．oH价“oo．C卜■oN寸卜．NN价N．0o■．【价o．oo'【．ooo式oo．No岬Nn①．o蕊“oo．C卜n．oN寸卜．NN价卜oo■Hno．oo_【．ooo．Noo式o■N价⑦．oHn“oo．C卜■oN寸卜NNo∞．-【no∞．Hno∞．一nnN．oo价．一价o．0oH．ooo“oo式o■Nn⑦．o．【■noo．C卜■oN寸卜．NNn●oo吮Hno．ooH．ooo．乙oo．Non式n⑦．oH岬价oo．C卜n．oN寸卜NNo∞．_【no∞．一n价N．oo乜Hno．oo'【．ooo．Noo．乙o■Nn⑦．o—n．价oo．C卜价．oN寸■NNo∞．-【no价．一价o．0o．【．ooo．乙。岬Nn吼．o．【n“oo．C卜n．0N寸tNNo∞．In寸N价N．oon．一价o．0oH．ooo．乙oo．Non“n仓．0H吮价oo．c卜岬oN寸卜NNo∞．Inon．I价o．oo'【．0oo式oo．乙。价．N价⑦．o-【乜noo“卜■oN寸卜．NNo∞．-【non．Ino．oo一．ooo．Noo．乙。吮NNC．．【∞∞．coo．c∞寸．9Noo．0oo．C价苗苫ou甾蜒跚野回母∞一笺}{赛举糕醐辙甾酶跚苗芝。甾蝻趟躁骶苗苫u甾膝陋葚咯寸营苫盘蔷罹邻蝼如蛾II—nb葑。暑。善掣醐噼闷cJo葛D一Ⅵu—pIog罹噼盘麓92(III一吕是>葵赠聪b蚺zx—gQJd一盘QII—g婪赠聪媒蚺II一量oQ一婴越虽一一。磊ocl分们黑心一lo专q是删苗器hb。D计枯熙营芬急长瓮QI：【事集越悄＼f／一矗g是op分∞桀㈦一器吕专q集删岍卜．o苗_艺oU呐N．o苗_^IoU晌to矗固一_乏II晌N．om卜．o晌N．om卜．omN．o矗∞一窆宣艺窆0苗窆0苗窆U陶rI函II叻_葺。一弓Q．I∞蜀一求餐的堇盆骊葵S^俩十。96v辖求求镁枨粗越椒陧葵S_【_￡僻罾蘸g趟岖拳车蜓皿随隧旺暴察S，半州删蠡删椒K靛甾蝻跚g懈淤匿k最蜂导亲S匝冥帐薹万方数据 n∞nN。oN}{．qo∽口N‘suI。∞．oNH．口o∽D山‘暑III。H。oN}{_寸o∽ju‘8III。价‘(摹H一_u。u‘8吕。心爻noHiu‘sg。N‘co。∽岔Z¨^苗一它∞≤∞g∞gvXIgQJd一皂QII一毫．c．8导．乙云∞。一；一一。u。IIII墨∞套Q。8一III‘89。。。寸．QplJo一号QII一一。专‘8&。。。N．pI譬。一qJ。。冷‘暑III。葛．10矗二A。o。丫对工dl时‘s暑n．10奄鼍。一8。一。皇。‘sgNn。D瓮苗譬一。II一苗J‘∞g。姆．Il一芑一D‘sg。N．pI。时。IIoJ‘8昌。。N．pI。时II一譬Iu‘sIII。∞．pIQ矗。一IIo专。意A‘89。。8‘l旦IS。II一‘8III。I‘c澎II一吕霉IA‘宕g。H奎∞II—Iug一>萌暑。N．一uZ-9IIIx。pI文A‘89价寸。口一意口。p—J‘∞gnN．矗一骞盘专：(苍Ip∞≤∞J0∞uIvxI吕。JdII—IIrgIA式．N嶝．。．uII—II。D皇_一Nn．。。II一一时>一。寸．。。II一口舟一对一入口。矗厶一卜N．H箸Is互寻N．云a13拿。一‘6寸。da召；o—os黑①卜．云口趸∞畏^n。。。价N．o)苗荟。u．^譬．o‘价N．o)醇∞_苫}{癸。。．价N．o)苗苫。套-。．nN．o_)苗窆u分山1)一矗暑专q．事。一．价价．o。。II一口oo．】[IIp一寸H．oQII一一心>一吼n．oo口一葛霄一矗一》II。lcI‘￡岬。DIlIs互‘乙∞．o．QuI。；o一‘乙￡．。．。口一。T、o—oS一‘o寸．'【．Q盘lul暑急．(山z一∞苗Ip一心Dul老蠕二∞一Z一^苗1p基vxIguJd∽pI譬。ulg日一囊甚Q∞∞。．1．sS。Z三j鹾唧恤。妪澄幢。幂雌邃“二i溅酶扭。髻眯程。罹邻蠼寻os⑦寸．8．集博爨一∞。一．嚣蛹¨甾搭‘暑g。。2．举甾鹾‘sIun寸．蟮甾挂‘暑Iu。n．嫩鹾谣一∞g。∞．蝼目甾挺面吕。H．晤甾梧*旧一∞暑。价．^装一v担晕晦‘暑g。∞．妪甾嫠一∞暑。N器甾匿目^禁S堂／sg∞暑v器如赠相暴限．C。芒寸NH．帐媒士一咯器‘暑旨。。。寸．謦型罩蟥．sg。。。N6帐州媒‘89。葛．∞帐州媒‘89n‘cQ帐州媒‘昱gNn．《帐删想‘暑III。婚．帐器州．sg。N．程古∞g。。N．甾要一∞g。心．蟮甾蠼‘暑g。。∞．谧妄‘8暑。1【‘c澎帐州慧‘89。．【二五帐州姆‘暑g。N‘9∞懈州媒‘s吕虮寸．帐襁辎一∞g羚二∞帐州媒饕寺N．H甾蝻根‘6寸．o甾酶根球‘6●一。窭墨蛩／8Jo∞暑vS邻赠帐州媒．N。N∞．0甾蝻拣‘乙价．。甾蛹爨一。节。甾腻怪将心N．H甾酶豁酶桨案t。．冷．o)苗苫。u‘(譬．o‘价N．o)对∞卜至王‘(n卜．o‘罱．o)苗毫。癸●。．nq。一苗至u‘(‰1)鼎集删警。坎．o甾酶橡寻I．o滏蝻爨‘6C．。甾酶幢将‘C价．0甾酶饕一N∞．o甾酶恨心C．。甾蛹懈球憎忖一悟腻撄k旧惯～博窿㈨恒K傣旧际～懈㈣懈№健_。燃。寸on寸．一价心寸Nc．N'【⑦n“寸nn．9n寸．on小．o价N．寸．【N．乙1【寸n“寸C．心oN．oo卜o6￡．。．【寸。N寸．o①￡．。。寸．o是．。口￡．。∞￡．。^装v饕≮甾分氍蛹墨汁。寸．【卜n．寸n￡．N1【nn“寸c．∞oN．o寸西．0N岬寸1【n“1【o岬价寸c．岭o■on寸HnN．寸岣寸．N'【⑦寸“寸C．心oN．oN△．o岣c．寸￡1一'【n岬n寸c．∞o■oH寸H寸岔．o∞■寸。卜on一．寸H寸．寸寸N．N1【寸寸．N．【NC．N'【n岔．o∞n．寸卜心“H岭价．n寸n寸．价寸N寸．n寸N价．n寸oN．onn．∞o●oC．∞虮①．o卜H寸oo．o^摹v。口一tIo一专og甾)蓍眦^装v。吕置og求*^摹vpI占。它已Q龌婴桑^装vII—o芑Jd。吧nJQⅢ趟娶辖隶隶键葵STxl92dSpI譬。口一趸甾醐酶如赠警H悬Iv-1Q澄酶暖兽醯g毯哒蓉芒蟋皿咖越旺熏婪S，半娥删暴删枢K茛甾酶嘲g错龄匿k最蜂廿荽S万方数据 口N一价o．ovQ-QQao．Ip龆一它_口∞Qq一口眦一∞口母o_II∞-o#o一一一矗g∞勺o_Q一-o们-oCI；们_IIo．Im器一它I：【=警、．II_IITl一oooHII四们oI：【pII一∞o拿一对>一Q_oZ。^价o．ovd)郴吲呔州临僻匣K对仆蠖叫七b民1匣。趟D∞”．C价州N心．6卜H声母nn．nN刊oo．∞nH(I母①寸．心N州①寸．∞卜H号∞寸．6刊N卜∞NHD四N心．．【'【卅价∞．o∞Hp寸N．N岔刊寸H．岣寸NcI时婚吮寸N刊oo．心n—D日⑦o．6∞书价■寸oN对卜n．∞N书o∞．卜-【'【D≈Nn．'【n刊．N①．n∞一声时。卜．价-【刊卜∞．△卜D时oo．卜刊oo．屿卜q1，8■nN刊oo．6∞D对oN．0州oo．I∞嘎。价“_【书卜婚．9∞D价心．cH刊卜岣．H小号寸o“_【刊oo．6np日卜①．oH州nn．∞岭对。价．oN书nC．∞寸岔■o刊∞c．HnN．o刊心卜HnN．o州吼c．'【oN．o州⑦■HCI．o刊心●．【卜H．0卅N卜'【NH．o刊寸C．．【寸N．0刊nC．HCI．0刊no．ND时oo．'【刊oo．价卜寸_【．o剞⑦寸．Hoo．9N叫oo．岔岣o∞．nN刊卜∞．n卜n心．CH州nC．岔寸卜o．寸一刊oo．卜寸n心．nH刊卜均．卜卜cI时oo“寸剞oo“吼寸pn心．岔n卅nn．HNnnrB寸∞．Nn州卜D．卜屺寸D时卜．【．nn刊卜心．∞∞寸cI对∞n．∞H州nn．non岭n．nN。100．吼卜D'【n．⑦N州oo．nN价寸H寸．【州oo式nno．心州nn．婚婚寸o．9一书oo式寸_【∞．oN刊卜婚．9心口砖oo．6寸州n￡．oo价^≮N寸．寸'【刊oo．寸卜寸矗on．△刊nn．卜H寸D时寸卜．心N刊nn．卜价寸n卜。苗叫20UnN．o苗_二oU”卜．o时m一一鼍‘ZnN．o母∞卜窆王n●o苗q二。价N．0苗毫。价■o苗q、IUnN．0苗艺U日一‰王装盈叫山装／丑皿装／I皿装、甾∽装＼甾．D．／嗲∞芯一Q讲较峰皿嘲斟较葵匿斟邻蹬料烬悼讲唧磬黑剐划^c_盘：穹∽刊叻葺墨暑=QII盘oAn：毫u2u墨§l，盘釜毫8．Io卫矗o．Iuk事o=o净Qw．I矗_-o盎。一_畏簋II-；弓00弓盘矗Qu口矗_管．IoJ．Io盘II-参o．I眦QII-盘。的ou．I拿o∞o．IQ盘一葺。一毒-o_嚣k^．I畏_o一々-o_u∞嫡啊固N．n．盆靠一^￡．u‘舀．s刊窨墨昌v善醯g旺熏葵器冥涩掣半州删般K莨程酶啦g懈龄匣长熏已曩蜂廿实器N-￡僻二ipI譬。专吕nJU瓮IIo—doJdgj—o一8．o=D一目一pIo芝“．'【一'【ioII—Q》一M—oII一对苍(IoII时_u时基《．寸．暑小节∞．Q=一QoN醯oH．oN王．爿寸。山N}{言u醯吕ooNH．oN}{●寸o∽比q二醯g价寸．oN墨．寸o∽口叫乏砬go价兽醯g遐呕藩芒峰皿跚隧旺熏禁尽，半州删蕊删椒K莨甾蛹嘲g佰龄匠k景蜂七b龚匿万方数据 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响表3．3饲料中添加几种不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼体组成的影响(％，湿重)(means±S．D．，n=3)Tab．3-3Effectsofdietarymethionineresourcesonthebodycompositionoflargeyellowcroaker(Larmichthyscrocea)juveniles(％，wetweight)(means±S．D．，n=3)注：同一列中上标字母不同表示差异显著(p<0．05)。Note：Valuesinthesamecolumnwithdifferentsuperscriptedsmalllettersmeansignificantdifference(p包埋蛋氨酸>蛋氨酸羟基类似物>晶体蛋氨酸，肝脏谷草转氨酶活力顺序由高到低依次为寡聚蛋氨酸>包埋蛋氨酸>晶体蛋氨酸>蛋氨酸羟基类似物，但差异不显著(p>0．05)。3．2饲料中添加几种不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的影响由表4．2可以看出，饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼的血清谷丙转氨酶和血清谷草转氨酶没有显著影响(p>O．05)。对比添加0．25％不同形式的30 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响蛋氨酸各组，血清谷丙转氨酶活力顺序由高到低依次为包埋蛋氨酸>寡聚蛋氨酸=晶体蛋氨酸>蛋氨酸羟基类似物，血清谷草转氨酶活力顺序由高到低依次为包埋蛋氨酸>寡聚蛋氨酸≈晶体蛋氨酸≈蛋氨酸羟基类似物。3．3饲料中添加几种不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼血氨、尿素氮的影响由表4．3可以看出，饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼的血氨和尿素氮含量没有显著影响(p>0．05)。对比添加0．25％不同形式的蛋氨酸各组，血氨含量顺序由高到低依次为寡聚蛋氨酸>包埋蛋氨酸>蛋氨酸羟基类似物>晶体蛋氨酸，尿素氮含量顺序由高到低依次为包埋蛋氨酸>晶体蛋氨酸≈寡聚蛋氨酸≈蛋氨酸羟基类似物。4讨论实验结果表明，饲料中补充的外源蛋氨酸的种类显著影响了大黄鱼幼鱼的肝脏谷丙转氨酶活力和肝脏谷草转氨酶活力。对比高鱼粉对照组(HF)和低鱼粉对照组(LF)比较可以看出，豆粕替代40％的鱼粉，大黄鱼幼鱼的肝脏谷丙转氨酶和肝脏谷草转氨酶活力明显下降，这与以上研究中LF组大黄鱼生长低于HF组结果一致。对比添加0．25％不同形式的蛋氨酸各组，肝脏谷丙转氨酶活力顺序由高到低依次为寡聚蛋氨酸>包埋蛋氨酸>蛋氨酸羟基类似物>晶体蛋氨酸，肝脏谷草转氨酶活力顺序由高到低依次为寡聚蛋氨酸>包埋蛋氨酸>晶体蛋氨酸>蛋氨酸羟基类似物。这与以上研究中添加相同含量的不同形式蛋氨酸大黄鱼增重率、饲料效率和蛋白质效率的顺序基本一致。肝脏谷丙转氨酶和谷草转氨酶是蛋白质合成代谢中的主要转氨酶，其活力大小直接反应了蛋白质合成代谢的效率。不同添加形式的蛋氨酸可能主要通过影响了肝脏谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活力造成蛋白质合成率的不同，改变了饲料效率，影响生长。由实验结果可以看出，寡聚蛋氨酸组与低鱼粉对照组(LF)相比，肝脏谷丙转氨酶和谷草转氨酶显著提高(p0．05)，说明各处理组大黄鱼幼鱼没有肝脏病变的情况。另外，饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼的血氨和尿素氮含量没有显著影响(p>O．05)。血氨和尿素氮是蛋白质分解代谢的主要指标，对应第三章中不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长的影响，进一步说明了，饲料中添加寡聚蛋氨酸和包埋蛋氨酸与晶体氨基酸相比，可能是由于其蛋白质的合成代谢明显提高而对分解代谢影响不大，从而促进了蛋白质效率的提高，促进了大黄鱼的生长。5结论由实验结果可以看出，饲料中添加不同形式的蛋氨酸显著影响了肝脏谷丙转氨酶和肝脏谷草转氨酶活性，而对血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶活力和血氨、尿素氮含量无显著影响。寡聚蛋氨酸和包埋蛋氨酸与晶体蛋氨酸和蛋氨酸羟基类似物相比，之所以能更好的促进生长和饲料利用，其原因之一可能是增强了肝脏转氨酶的活力，提高了蛋白质的合成效率。关于寡聚蛋氨酸和包埋蛋氨酸促进大黄鱼生长和饲料利用的具体原因尚不清楚，需要进一步探究。 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响附表和图表4-1饲料中添加几种不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼蛋白代谢的影响(means±S．D．，n=3)Tab．4-1Effectsofdietarymethionineresourcesonproteinmetabolitesoflargeyellowcroaker(means±S．D．，n=3)注：同一列中上标字母不同表示差异显著(p<0．05)。Note：Valuesinthesamecolumnwithdifferentsuperscriptedsmalllettersmearlsignificantdifference(p<0．05)． 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响表4．2饲料中添加几种不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼蛋白代谢的影响(means±S．D．，n=3)Tab．4-2Effectsofdietarymethionineresourcesonproteinmetabolitesoflargeyellowcroaker(means±S．D．，n=3)注：同一列中上标字母不同表示差异显著(p<0．05)。Note：Valuesinthesamecolumnwithdifferentsuperscriptedsmalllettersmeansignificantdifference(p<0．05)．34 万方数据饲料中添加不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼生长、饲料利用及蛋白质代谢反应的影响表4．3饲料中添加几种不同形式的蛋氨酸对大黄鱼幼鱼蛋白代谢的影响(means±S．D．，n=3)Tab．4-3Effectsofdietarymethionineresourcesonproteinmetabolitesoflargeyellowcroaker(means±S．D．，n=3)注：同一列中上标字母不同表示差异显著(p<0．05)。Note：ValuesintheSaJiTIecolumnwithdifferentsuperscriptedsmalllettersmeansignificantdifference(p