阿克拉霉素对米托蒽醌杀伤hela细胞影响

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1、⋯一⋯．皇查楚蓬。．_—^-__m-r_“_一-_____H______H_____—_——HH—_ⅢH___"w—_w_⋯一一隧克拉霉素对采托慧纛豢伤Hela绷艟麴影礁攘簧氍酌：零实验愿Hela缨憨(人窘鞭癌缨臆株>终必受试对象，搽埘掩羚异褥酶II(t懋poisomerase,topot[)镁纯捧瓣裁瓣爽拉霉素(Adambicin,ACR)黠tolm]I毒毪拇剿粼米援薄蘸(Mitoxart艇'one,MIT)攥掰鹣影响。努浚：将Hela缀黪在37℃，5％懿C02舔瓣下避符传幸℃结养。待续施进入对数生长期鼹，鞭斑趣入撇

2、(O。2瑟tool／L)处理20分钟后，蔼舷入零瀚浓度的MIT(InM、5nlVl、10nM、鞠nM、100riM)佟臻l夺瓣。辫设辋溺浓度酌MIT攀独麓蕊缀，戳及黼豫对照样菇。缎照羟蕊秘露耀悉主瑟掰予检溅下箩

3、j实验指标梭测：(1)双荧光分糈缨簸谰亡蜜；将细施愆磷酸缓神滚(p嚣S)剁缓细瓞簸波。翔吖碇撩(AO)翱酸zI涎(EB)番为100ll妫丽混合染液染色。每组榉晶随飘稔测300个缨臌，并计数细臆游率、照疆诡泶。采耀t捡骏分析熨黢络祭。(2)攀细施凝胶奄泳：缨飚每低熔点黥臻糖凝驳混合粼笄，热入猿慷裂解渡佟羽{小辩，

4、憩溶30势钟，詹经巾鞠、染惑、荧嵬显微穗分耩记录。嶷验羧擞采翅t捡验滋行统计分橱。(3)免发纲胞鼗学狻灏topolI表达：绷赡爬靖，翔入药耨作爝麓，缀豳定、惨复挽簸、瓣鞭内源矬过氯讫物薅、以及封闭薯舅特爨矬抗体。然詹壤次麓一撬，小鬣抗入topo强多克隆抗体、二獍(小鼠l鬻G)、兰撬(链醛辩鑫褰标记的辣搬避氧纯褥黪，HRP)露耀、二甄基联攀黢中文摘要(diaminobenzidine；DAB)显色，显微镜分析、照相。以上各项检测指标均以不加药物组细胞作为实验对照。实验所得数据采用t检验进行统计学处理，所有统计过程均在SP

5、SS10．0统计软件包中进行。结果：采用AO／EB双荧光染色观察不同用药组之间细胞凋亡的差异，可见细胞经不同浓度的MIT单独作用后，于50riM、100nM浓度下细胞凋亡明显，20小时后凋亡率>90％，说明凋亡率随药物浓度的增加而增加。ACR预先处理后再加入MIT于10nM、50nM、100nM浓度时的凋亡率与相同浓度MIT单独作用的凋亡率相比较，凋亡率低，二者有显著差别。在单细胞凝胶电泳实验中我们观察到：单独加入0．2uM的ACR作用后未见明显的DNA断裂。MIT(1nM、5n／Vl、10nM、50nM、100nM)

6、单独用药组，可见细胞DNA断裂的断裂程度随着药物浓度的提高而增加。经预先加入O．2lamol／L浓度的ACR作用20分钟后，再加入MIT作用1小时后与MIT单独用药样品之间比较，ACR能够抑制MIT造成的DNA链的损伤。进一步采用免疫组织化学方法，检测不同药物组作用后对Hela细胞内topoII的表达情况可见：ACR预先处理组和MIT单独处理组与对照组相比topoII表达增加；经预先加入0．21．tmol／L浓度的ACR作用20分钟后，再加入MIT作用l小时的Hela细胞与MIT单独用药样品之间比较，topoII的表达

7、减少。结论：(1)topoII活性抑制剂ACR与topoII毒性抑制剂MIT能够诱导细胞凋亡。ACR能够干扰MAT对中文摘要Hela细胞的抑制作用，使细胞凋亡率下降。(2)ACR可拮抗MIT对Hela细胞DNA链的损伤，使DNA链断裂减少。(3)ACR可拮抗MIT对Hela细胞topoII的表达，使topoII的表达水平降低。关键词：阿克拉霉素，米托蒽醌，细胞凋亡，拓扑异构酶II，单细胞凝胶电泳，DNA链断裂。3英文摘要TheeffectsofAclarubicinofHelacellsonMitoxantroneki

8、llingABSTRACTObjective：Toinvestigatetheeffectsofaclarubicin(ACR)onmitoxantrone(MIT)inducingHelacellDNAstandbreaksandapoptosis，asafurtherstudyonthemechanismoftopoisomeraseIIinhibitors．’Method：HelacellsweremaintainedinRPMI．1640mediumsupplementedwith10％newbronecalf

9、serum(Ncs)，and1％antibiotic—antimycoticsolution(100units／mlpenicillin，100pg／mlstreptomycin，25Ug／mlamphotericinB、．Theyweregrownat37"Cinahumidifiedatmosphereof5％C02Cells