法舒地尔对氧化乐果染毒大鼠心股细胞保护作用及机制实验的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文缩略词AIATgroupBSACMDMEMDMSOHHgroupHPgroupLDHLPgroupLHgroupMHgroupMPgroupNCgroupODPBSPCgroupTunelUNgroupApoptoticindex缩略词表Abbreviation英文全称PoisoningtreatedwithatropinegroupBovineserumalbuminCardialmyocytedulbecco’smodifiedeagle’smediumdimethylsulphoxideHighdoseHAl077groupHighdosepoisoninggr

2、ouplactatedehydrogenaseLowdosepoisoninggroupLowdoseHAl077groupModeratedoseHA1007groupModeratedosepoisoninggroupNormalcontrolgroupOpticaldensityPhosphatebalancedsolutionPoisoningcontrolgroupTdT．mediateddUTPnickendlabelingPoisoningtreatedwithHA1077plusatropinegroup1中文全称细胞凋亡指数中毒阿托品治疗组牛血清白蛋白心肌细胞DMEM细胞

3、培养基二甲基亚砜高剂量治疗组高剂量染毒组乳酸脱氢酶低剂量染毒组低剂量治疗组中剂量治疗组中剂量染毒组正常对照组光密度磷酸盐缓冲液中毒对照组原位末端标记法中毒法舒地尔邯可托品联合治疗组徐州医学院硕士学位论文法舒地尔对氧化乐果染毒大鼠心肌细胞的保护作用及机制的实验研究中文摘要目的1．采用急性氧化乐果(Omethoate)中毒大鼠模型，研究法舒地尔(HAl077)对中毒后心肌损害的保护作用及机制。2．采用氧化乐果染毒的离体培养心肌细胞模型，观察法舒地尔对染毒离体心肌细胞的影响及其可能机制。方法第一部分：法舒地尔对急性氧化乐果中毒大鼠心肌损害的保护作用及机制1．40只雄性SD大鼠随机分4组(n一10

4、)：正常对照组(NC组)、中毒组(PC组)、阿托品治疗组(AT组)、法舒地尔邯可托品治疗组(UN组)。2．采用腹腔注射氧化乐果(160mg／kg)制作中毒模型。染毒后3min，AT组、UN组给予阿托品(10mg／kg)肌肉注射，之后根据大鼠流涎、瞳孔大小等情况确定阿托品用药次数；其中，UN组在注射阿托品后即刻又给予法舒地尔腹腔注射、继而以q8h维持治疗；对应时间点，AT组和PC组腹腔注射等容积的生理盐水。NC组仅给予等容积的生理盐水腹腔注射。各组实验动物观察48h后脱颈处死或者中毒死亡后立即开胸取出心脏留取标本。3．采用HE染色、Tunel法，免疫组化染色，观察各组心肌标本的病理学改变、心

5、肌细胞凋亡指数及Bcl．2、Bax蛋白表达水平的变化情况。第二部分：法舒地尔对氧化乐果染毒大鼠培养心肌细胞的影响及其机制1．在Langendorff装置上，用胶原蛋自酶逆灌注分离出雄性SD大鼠心肌细胞(CM)，DMEM中常规培养。2．按培养基中氧化乐果剂黾，分为低剂量中毒组(LP)、中剂量中毒组(MP)和高剂量中毒组(HP)。培养12h，根据各组CM的存活率，选取理想的剂量进一步实验。2徐州医学院硕士学位论文3．按培养基中法舒地尔剂量，分为低剂量法舒地尔组(LH)、中剂量法舒地尔组(MH)和高剂量法舒地尔组(HH)。培养12h，根据各组CM的存活率，选择最佳法舒地尔剂量进一步实验。4．根据

6、CM的存活率结果，选择正常对照组(NC)、MP组、MH组进行以下实验。在3h、6h、12h及24h时，测定各组CM的收缩幅度。培养12h，收集各组细胞培养基及细胞蛋白，测定培养基中的LDH含量及心肌细胞Bcl．2和Bax蛋白的表达水平。结果第一部分：法舒地尔对急性氧化乐果中毒大鼠心肌损害的保护作用及机制1．各中毒组大鼠生存状况和中毒症状的变化PC组大鼠于染毒后29-&6．3min全部死亡。在染毒后48h，UN组9只大鼠存活，1只于第28h死亡；AT组7只存活，3只死亡(死亡时间，23．3+2．1h)。与AT组比较，UN组大鼠中毒程度减轻，症状消失时间提前，其中肌力、肌颤差异有统计学意义(P

7、<0．01)。2．各组大鼠心肌AI变化与NC组比较，AT组、UN组心肌AI显著升高(P<0．01)，PC组心肌AI略有升高，但差异无统计学意义；与AT组比较，UN组心肌AI显著降低(氏0．01)。3．各组大鼠心肌组织的Bax、Bcl．2蛋白表达的变化与NC组比较，AT组、UN组心肌组织的Bax蛋白表达增加、Bcl．2蛋白表达减少、Bax／Bcl．2比值升高(P<0．01)，PC组心肌组织的Bcl．2蛋白表达明显减少(尸<