毕拨明宁碱%2f二氢毕拨明宁碱抑制sk-n-sh细胞aβ产生及作用机制研究

《毕拨明宁碱%2f二氢毕拨明宁碱抑制sk-n-sh细胞aβ产生及作用机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、山东大学博士学位论文中文摘要第一部分毕拨明宁碱／二氢毕拨明宁碱通过抑制SK-N．SH细胞APP的表达抑制Ap的产生目的：阿尔茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)是一种逐渐进展的神经系统退行性疾病，其特征为逐渐加重的痴呆和认知功能的障碍。AD最为显著的组织学特征为大脑皮质细胞外出现由D类淀粉多肽(amyloidp，Ap)积聚构成的老年斑(senileplaques，sP)。p淀粉样前体蛋白(amyloidprecursorprotein，APP)是一种I型跨膜糖蛋白，APPf圣_J3分泌酶和丫分

2、泌酶水解能够产生Ap。p分泌酶和丫分泌酶是APP水解产生Ap的关键酶，能够调控AD的产生。以往研究发现中药海风藤提取成分毕拨明宁碱／二氢毕拨明宁碱能有效抑制人神经母细胞瘤细胞(SK-N．SH细胞)的APP的蛋白表达水平，但是该药是否能够最终影响AD的水平以及p分泌酶和丫分泌酶的活性，需要进一步实验证实。本实验着重研究中药海风藤提取物毕拨明宁碱／--氢毕拨明宁碱能否抑制SK-N．SH细胞的A13产生和药物对p分泌酶和丫分泌酶的影响，以及药物可能的作用机制。方法：用生药学的萃取和层析方法从中药海风藤中提取了毕拨明宁

3、碱／--氢毕拨明宁碱(1：0．8)成分，然后用浓度3．13pg／mL，6．25pg／mL和12．50肛g／mL的毕拨明宁碱／二氢毕拨明宁碱处理SK-N—SH细胞22小时。之后，分别采用MTT法检测细胞活性和乳酸脱氢酶(1actatedehydrogenase，LDH)释放法检测药物对细胞毒性的影响。采用WesternBlot法检测SK-N．SH细胞Ap42和Ap40多肽的表达，酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)检测Sl(-N-SH细胞A1342和AD40

4、的产生的浓度。另外，采用WesternBlot法检测APP、Noah胞内区多肽(Notchl)和D．位APP切割酶(BACE．1)蛋白的表达。同时，采用免疫细胞化学染色法检测SK-N．SH细胞Ap42的表达。另外，采用荧光分析法检测药物对SK-N．SH细胞p．分泌酶和丫．分泌酶活性的影响。结果：实验结果显示，实验浓度的毕拨明宁碱／--氢毕拨明宁碱(3．13“g／mL，6．25llg／mL和12．50肛g／mL)和O．I％DMSO对SK-N—SH细胞的活性无明显影响，无明显的细胞毒性俨>0．05)。实验浓度的毕拨

5、明宁碱／二氢毕拨明宁碱(3．13lLLg／mL，6．25I_tg／mL和l2．50弘咖L)能有效抑制SK-N-SH细胞APP蛋白的表达和6山东大学博士学位论文减少A胁和A]340肽的产生(尸0．05)。实验浓度的毕拨明宁r婀i／--氢毕拨明宁碱对Sl㈧．SH细胞

6、的p．分泌酶和丫-分泌酶的活性无明显影响(P>O．05)。结论：实验结果提示浓度为3．13pg／mL，6．25}Lg／mL和12．50pg／mL的毕拨明宁碱／二氢毕拨明宁碱复合物能有效的通过抑制APP蛋白的表达，减少SK-N—SH细胞Afl42和A胁多肽的产生。各浓度的毕拨明宁碱／二氢毕拨明宁碱不能影响SK-N．SH细胞的D．分泌酶和P分泌酶的表达和活性。关键词：Alzheimer病；类淀粉前体蛋白；B类淀粉多肽；13-分泌酶；丫．分泌酶；毕拨明宁碱；二氢毕拨明宁碱；海风藤第二部分毕拨明宁碱，二氢毕拨明宁碱抑制

7、SK-N—SH细胞p类淀粉前体蛋白基因启动子主要启动调控区蛋白结合活性及机制研究目的：Alzheimer病(Alzheimer’sdisease，AD)虽P阿尔茨海默病，又称老年性痴呆，是一种逐渐进展的神经变性疾病。AD最为显著的组织学特征为大脑皮质细胞外出现由p类淀粉多肽(amyloidp，AJ3)构成的老年斑。p淀粉样前体蛋白(amyloidprecursorprotein，APP)经p分泌酶和丫分泌酶水解能够产生Ap。彳即基因定位于人类21号染色体2区l带，么即基因的表达主要由其启动子调控，还受到激活蛋白

8、．1(activatorprotein．1，AP．1)和白介素一1(interleukin．1，IL-1)的调控。在彳即的启动子内，起主要作用的是彳艘基因的启动调控区(proximalpromoterregion,PPR)，位于其翻译起始位点上游一46至．1碱基之间。在彳胛的PPR区内有7个碱基也同时为AP．1的结合位点(TGACTCG)，能够接受AP．1的调节。夏文等采用RT-PCR