降脂益肝冲剂对非酒精性脂肪肝大鼠肝组织糖类应答元件结合蛋白(chrebp)mrna表达的影响

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1、山西医科大学硕士学位论文降脂益肝冲剂对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏组织糖类应答元件结合蛋白(ChREBP)mRNA表达影响的实验研究摘要目的：非酒精性脂肪性肝病(M盯LD)，代表了一组以甘油三酯在肝内过度贮积而引起的临床病理综合征，其范畴包括单纯性脂肪肝(NASFL)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和NASH相关性肝硬化。目前认为其属于代谢综合征(MS)的范畴，胰岛素抵抗及炎症因子的参与是其发病的重要环节。糖类应答元件结合蛋f刍(ChREBP)是一种与糖类应答元件(ChRE)结合的蛋白质，调节糖酵解酶和脂肪合成酶相关基因的表达，ChRE

2、BP通过对成脂相关基因的转录调控在肝脏脂质合成中起重要的决定因子的作用。最近的研究表明ChREBP在非酒精性脂肪肝中表达增加，并且与胰岛素抵抗有关。本实验采用高脂胆固醇饮食建立非酒精性脂肪肝大鼠模型，动态观察大鼠肝组织中糖类应答元件结合蛋白(ChREBP)mRNA的表达情况，对糖类应答元件结合蛋I刍(ChREBP)在NAFLD发病机理中的作用进行初步探讨，同时观察降脂益肝冲剂对肝组织糖类应答元件结合蛋l兰t(ChREBP)mRNA表达的影响，探讨其可能的分子治疗机制，为其更广泛的临床应用提供实验依据。方法：1．动物模型的建立及标本

3、的采集：48只雄性Wistar大鼠正常喂养一周后，随机分为正常对照组(N组)：给予正常饲料；模型对照组(M组)，药物干预组(D组)：给予高脂饲料(85％普通饲料，13％的猪油和2％的胆固醇)，每组16只，分别设8、12周两个时相点，每个时点8只大鼠，相对应的组别为N1、N2，M1、M2，D1、D2组。D1、D2组分别于实验开始及第8周末，给予降脂益肝冲剂lml／1009，以0．8∥ml的浓度溶解灌胃，每日两次，分别持续8W及4W。同时M组和N组分别给予等量的生活饮用水灌胃：实验结束后分阶段处死各组大鼠，自腹主动脉采血，迅速取出肝脏

4、，按常规制备血清、肝匀浆以及肝组织切片，并留取少量肝组织于．70℃低温保存。2．检测指标：测体重、体长、肝脾湿重，并计算肝指数(肝湿重／体重x100％)、Lee’s指数(体重o‘弱／体长x1000)及肝脾比值(肝湿重／脾湿重)等体质指标；全自动生化分析仪测定丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血脂及肝组织脂质含量，葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FBG)，铜染色法测定血清和肝组织FFA水平，放免法测定血清空腹胰岛素(FINS)和TNF．a水平，计算胰岛素敏感指数(ISl=ln(1／(FINSxFBG)))；比色法测定血清

5、和肝组织GSH含量，黄嘌呤氧化酶法测定血清和肝组织SOD活性；硫代巴比妥酸法测定血清和肝组织MDA含量；光镜下评估脂肪变性和炎症活动情况；逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定肝组织糖类应答元件结合蛋白(chREBP)mRNA的表达。结果：1．N组大鼠肝小叶结构完整，肝索围绕中央静脉呈放射状分布，细胞呈多边形，大小较一致；各项生化指标均在正常范围；糖类应答元件结合蛋白(ChREBP)mRNA表达微弱。山西医科大学硕士学位论文2．8周末，模型组大鼠出现了明显的脂质代谢紊乱，伴随高胰岛素血症和胰岛素抵抗；血清转氨酶水平较正常组明显升高

6、，TNF，q水平升高；肝组织出现了轻到中度脂肪变，且无炎细胞浸润；肝脏糖类应答元件结合蛋白(ChREBP)mRNA的表达较其对照组显著升高。用药组大鼠血清和肝组织各项指标均明显改善；肝脂变程度较模型组明显减轻；肝组织糖类应答元件结合蛋白(ChREBP)mRNA表达显著降低(P<0．05)。3．12周末，模型组大鼠胰岛素抵抗程度较前无明显进展；和正常组相比，血脂和肝脏脂质含量、血清TNF．a含量、转氨酶水平明显升高；HDL-C含量明显降低；肝组织出现中到重度脂肪变，肝小叶内炎细胞浸润和散在的点状坏死，炎症活动度计分明显高于正常组(P

7、<0．01)；肝组织糖类应答元件结合蛋白(ChREBP)mRNA表达显著升高，且与前期相比差异显著(P<0．01)。用药组大鼠血清和肝组织各项指标均明显改善；肝组织糖类应答元件结合蛋I兰I(ChREBP)mRNA表达显著降低(P<0．01)；肝组织脂变程度及炎症活动度明显减轻(P

8、末二者无相关性。结论：1．高脂高胆固醇饮食可以成功复制NAFLD大鼠模型；胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱、氧化应激＼月旨质过氧化损伤以及炎症因子如TNF．Q紊乱与NAFLD的发生密切相关。2．正常大鼠肝脏可表达糖类应答元件结合蛋白(ChREBP)，NAF