佛波醇提取分离工艺分析

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文TPA在分子结构上类似于PKC的天然激活剂二酰甘油，但是在细胞内更稳定，通过PKC的介导而发挥生理作用，短期作用激活PKC，长期作用引起PKC的耗竭，从而下调PKC的活性，具有双重调节作用‘2卜241。因此TPA可以作为探针试剂，判断PKC是否在某些细胞功能信号传递过程中起作用，帮助人们认识与PKC通路有关的疾病发生的分子机制。佛波醇酯单体的抗癌作用研究也比较多，如国内就有关于以佛波醇酯单体注射液作为治疗白血病的一类新药研究报道1251。但是，天然的Prostratin、TPA等其他

2、一些有价值的佛波醇酯单体化合物来源极少，且相互间结构类似，极性差别不大，分理出纯净的佛波醇酯单体化合物十分困难。Prostratin来源于南太平洋小岛萨摩亚(Samoa)的一种大戟科植物Mama肠树(Homalanthusnutans)，但该树种稀缺，已经被联合国列为保护物种，且每吨树干最低可以提取出0．2g，最高可以提取出52g左右的Prostratin，相差260倍，可见其在该植物中成分的变异率大，难以用一种技术从中分离出纯净产物，导致Prostratin的售价非常高(5．2万美元儋)118，351。为了解决

3、佛波醇酯的构效关系研究以及今后临床应用，人工合成该类化合物成为当务之急，2008年((Science))报道了斯坦佛大学著名教授PaulAW等人利用佛波醇为原料，通过较少的反应步骤，合成出了ProsU'atin及其类似物，不仅解决了新药的临床试验用量，而且为进一步筛选有临床应用价值的化合物奠定了基础1171。其大概步骤如下：HaC3AcjdjchyclrolysJs---——-—---—---—--●’8a4steps·-----·-_---。-__·_—■oH3CProstmtin(R=Ac)重庆医科大学硕士研

4、究生学位论文在此之前，PaulAW也对佛波醇进行过多年的全合成研究。但是由于佛波醇的结构比较复杂，目前人工全合成该类化合物存在步骤冗长、产率低的不足

5、26-281。美国加州大学贝克莱分校的JayKeasling领导的小组正研究利用基因工程技术制备Prostratin，但尚处于起始阶段。因此利用从巴豆油中提取分离纯化出佛波醇作为合成原料是目前的最佳方案。国内外关于佛波醇及其酯类的提取分离及结构鉴定的相关报道少之又少，且其提取分离过程也比较繁琐，一般实验室难以实现，周期也比较长。国外以往的提取分离步骤研究大体都是先将

6、巴豆油悬浮于己烷等极性非常小的有机液中，然后用亲水或者含水的有机液萃取得到亲水层部分，再经过液滴逆流色谱进行纯化分离f2"oJ。或者将巴豆种子先用亲水性的有机溶剂提取，经过己烷乙醚等亲脂性的有机溶剂萃取，再经过反相、正相柱色谱以及制备型的高效液相色谱仪进行纯化【311。液滴逆流色谱分离时间比较长，需要花较长的时间来筛选适宜的分离溶剂系统，普及难度比较大。制备型的高效液相色谱分离效果虽然好，但是运行成本行的提取分离方法显得非常有必要。我国是天然植物的大国，资源丰富，大戟科植物作为中药曾广泛用于临床。巴豆始载于《神农

7、本草经》，为大戟科植物巴豆(CrotontigliumLinn)的干燥成熟果实，是重庆、四川地区特有资源(巴豆来源于古代巴国，即现在的重庆和三峡库区)，资源较丰富‘32341。文献报道【32,34,361和预实验显示，巴豆中含有的佛波醇酯类衍生物是大戟科植物中已知含量较高的，开展从巴豆中规模化提取分离佛波醇的技术研究，对我国抗艾滋病、抗癌等新药的研究和临床应用具有重要的战略意义。本实验以巴豆种子为原料，在实验室制备出了较大量的佛波醇，该法周期短且无需特殊仪器设备，经济可行，所得产品纯度较高，为佛波醇的规模化提取分

8、离和进一步研究奠定了基础。9重庆医科大学硕士研究生学位论文第一部分：巴豆种仁中佛波醇的含量测定方法巴豆种仁中佛波醇的含量测定方法尚未见文献报道，建立该方法是研究和评价提取分离工艺的必要前提，及原料、资源质量研究开发的技术支撑。l实验材料1．1试剂与药品乙腈(色谱纯)甲醇(分析纯)氢氧化钡超纯水巴豆(CrotontigliumLinn)种子佛波醇对照品1．2实验仪器LC2010自动进样器LC2010柱温箱LC2010在线脱气机LC2010紫外检测器KQ2200B超声清洗仪器Sartorius1／10万电子天平RE一

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