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1、中华人民共和国国家标准肉与肉制品维生素A含量测定GB/T9695.26-91Meatandmeatproducts-MethodfordeterminationofvitaminAcontent━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1主题内容与适用范围本标准规定了肉和肉制品中维生素A含量的测定方法。本标准适用于肉和肉制品中维生素A含量的测定。2引用标准GB9695.19肉与肉制品取样方法3原理样品皂化后,用石油醚提取不皂化的维生素A,浓缩后,用高效液相色谱荧光检测器,激发波长340nm,发射波长460nm,分离测定维生素A,用标准外
2、标法计算样品中维生素A的含量。4试剂除特别标明外所用试剂全为分析纯,所用水应为蒸馏水或同等纯度的水。4.1氢氧化钾(GB2306):50％溶液;4.2抗坏血酸:10％溶液;4.3无水乙醇(GB678);4.4石油醚:沸程30～60℃;4.5无水硫酸钠;4.6异丙醇;4.7甲醇(GB683):重蒸后使用;4.8维生素A标准溶液:0.2mg/mL称取维生素A标准品10.0mg,用异丙醇溶解,移至50mL棕色容量瓶中,用异丙醇稀至刻度。当天配制。5仪器和设备5.1实验室常规设备;5.2绞肉机:孔径不超过4mm;5.3旋转蒸发器;5.4液相色谱仪,带荧光检测器;5.5色谱柱:十八
3、烷基键合固定相柱或其他能分离维生素A的柱子。6试样6.1按GB9695.19取样。6.2取有代表性的试样200g,于绞肉机中至少绞两次使其混匀,试样应尽快分析。7分析步骤7.1皂化维生素A易被光破坏,试验应避光操作。称取0.5～5g试样于150mL棕色皂化瓶中,加入10％抗坏血酸溶液5mL,50％氢氧化钾溶液15mL,乙醇30mL混匀,于80℃水浴上回流加热30～60min,使试样溶液清澈,完全皂化后于流水中冷却。7.2提取将皂化后的试样溶液移入125mL分液漏斗中,用30mL石油醚分数次洗皂化瓶,洗液并入分液漏斗中,塞上塞子,轻摇分液漏斗,避免乳化。静置,待分层后,将水
4、层放入第二个分液漏斗中,醚层留在第一个分液漏斗中。于第二个分液漏斗中倒入10mL石油醚,进行第二次提取,如此进行3～4次,石油醚层交入第一个分液漏斗中。石油醚层反复用水洗涤,直至水层不呈碱性(用pH试纸检查)为止,弃去水层。将分液漏斗中石油醚层经过无水硫酸钠脱水,滤入干燥的棕色圆底烧瓶中。再用石油醚洗涤无水硫酸钠和分液漏斗,洗液并入棕色圆底烧瓶中。7.3分析试样的准备将盛有石油醚提取液的圆底烧瓶与旋转蒸发器连接,于50～60℃水浴上减压回收石油醚,待瓶内只剩约1～2mL液体时,取下烧瓶,用氮气吹干剩余液体，立即加入2.0mL异丙醇溶液,摇匀,溶解瓶中维生素A,塞上塞子,以
5、防溶剂挥发,此为色谱分析样液。7.4测定7.4.1维生素A标准曲线的绘制取维生素A标准溶液1,2,3,4,5,6,7,8mL进行高效液相色谱(HPLC)分析,记录峰面积或峰高,以维生素A量为横坐标,峰高或峰面积为纵坐标绘制标准曲线。若样品中维生素A含量很低,可取维生素A标准溶液(0.2mg/mL)5mL,用异丙醇溶液定容至50mL容量瓶中,此标准溶液浓度为0.02mg/mL。如前进行高效液相色谱(HPLC)分析,绘制标准曲线。7.4.2色谱分析参考条件分析柱:十八烷基键合固定相柱式相同效用的柱;流动相:甲醇/水98/2;流动相流速:1mL/min;检测器:荧光检测器Ex:
6、340nm,Em:460nm;进样量:试样液4～6μL,记录峰面积或峰高。8分析结果的计算A×1000×V0计算公式X=────────×100V1×m×1000式中:X——样品中维生素A含量,mg/100g;A——根据试样的峰面积或峰高查标准曲线得到维生素A的量,μg;V1——试样进样分析的体积,μL;V0——试样最终稀释的体积,mL;m——称样质量,g。当符合允许差规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果。9允许差同一样品同时或相继两次测定结果之差不得超过平均值的30％。─────────附加说明:本标准由中华人民共和国商业部提出。本标准由中国肉类食品综合研究
7、中心归口。本标准由中国肉类食品综合研究中心起草。本标准主要起草人王津生、蒲健。───────────────────────────────────────国家技术监督局1991-03-26批准1991-12-01实施
