不同龋敏感人群变形链球菌产酸耐酸毒力因子遗传多态性研究

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1、独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，酴了文中特别以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得I四Jtl大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同L作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：杨德琴孝移砺努器签字几期：2。。5年。4月1。同学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解凹川大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文表查阅和借阅。本人授权

2、四川大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。学位论文作者签名：杨德琴掳铜睦券、导师签名：刘天佳签字R期：2005年04月10F]签字Fi期：2005年04月lO日学位论文作者毕业后去向：工作单位：遵义医学院附属口腔医院联系方式：yangdeqin@vip．sina．@om通讯地址：遵义医学院附属口腔医院邮政编码：563003四川大学华西口腔医学院博士学位论文缩略词＆mutansLDHF-ATPaseRFIPPCRAP．PCRGTFsP1，PAcFDPNADHRT-PCRsemi—

3、quantitativeRT．PCR英文缩略词表英文全称Streptococcusmutam'lactatedehydrogenasemembrane-boundproton-translocatingATPaserestrictionfragmentlengthpolymo-rphismspolymerasechainreactionarbitrarilyprimedPCRglucosyltransfemsessurfaceproteinFructose-1，6一diphosphatenicotinamideadeninedinucleotide

4、hyd-roge／lasereversetranscriptivepolymerasechainreactionsemi-quantitativereversetranscfiptivepolymerasechainreaction中文名称变形链球菌乳酸脱氢酶质子移位膜ATP酶限制性长度多态性分析方法聚合酶链反应随机引物PCR葡糖基转移酶表面蛋白1，6-Z-磷酸果糖还原性辅酶I逆转录．多聚酶链反应半定量RT-PCR四川大学华西口腔医学院博士学位论文不同龋敏感人群变形链球菌产酸耐酸毒力因子遗传多态性研究博士研究生：扬德琴导师：刘天佳教授中文摘要龋病是

5、危害人类口腔健康的主要疾病，是一种牙菌斑生物膜依赖性疾病。血清C型变形链球菌(Streptococcusmutans，简称S．mulans，变链菌)是牙菌斑生物膜中主要定植菌之一，也是最重要的致龋菌。变链菌的致龋作用包括菌细胞的粘附、产酸和耐酸三个环节。在牙菌斑中变链菌依靠酵解糖类生存，酵解产物有机酸特剐是乳酸导致环境pH降低，引起釉质脱矿发生龋病：同时．为了适应在低pH下生存和持续产酸，菌细胞必须维持一个相对中性的胞内环境，这主要通过菌细胞的耐酸能力得以实现，即酸适应性或耐酸性，故产酸和耐酸是变链菌致龋必备的两大生理特征。乳酸脱氢酶(Lactat

6、edehydrogenase，简称LDH)是致龋菌合成乳酸的关键酶，而质子移位膜ATP酶(membrane—boundproton—translocatingATPase，FoFIATPaset简称F-ATPase)是菌细胞耐酸力的最E要调节机制，因此。LDH和F．ATPase是变链菌的重要产酸耐酸因予，在龋病的发生发展中发挥重要的毒力作用。变链菌不同菌株的致龋毒力存在差异。毒力因子的基因变异是决定这种差异的重要物质基础。变链菌多态性研究近年束受到普遍关注，诸多研究证实全菌DNA和毒力因子DNA在不同菌株之间确实存在遗传多态性。本课题组前期己对不同

7、龋敏感人群的变链菌细胞组DNA多态性、粘附因子表面蛋白P1和葡2四川欠学华西口腔医学院博士学位论丈糖基转移酶基因多态性与细菌粘附毒力及龋病发蔓：的关系，以及菌株多项致龋毒力进行了系列研究，在此基础上，本实验对LDH和F-ATPase的遗传多态性及其与细菌产酸耐酸能力之间的关系作系统探讨，结果发现：1．LDH不同酶活性菌株在高龋和无龋人群的分布不同，变链菌LDH活性与龋病的发生有一定相关性，实验所用的考马斯亮蓝蛋白定量结合还原性辅酶I氧化法适于初步定量评价酶活性和菌株筛选。LDH结构基因ldh表现MseI．RFLP基因型多态，不同基因型菌株在不同酶活

8、性组的分布不同．提示乳酸脱氢酶基因多态性与酶活性差异相关：半定量RT—PCR发现两种基因型ldh的mRNA表达水平亦不同，