hsr对烧伤血清诱导的巨噬细胞tnf-α、hmgb1和il-10基因表达调控及其分子机制

《hsr对烧伤血清诱导的巨噬细胞tnf-α、hmgb1和il-10基因表达调控及其分子机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、博士学位论文中文摘要摘要第一章烧伤血清诱导的巨噬细胞系RAW264．7释放TNF_Q、HMGBl及IL-10的规律及意义目的：从细胞水平探讨烧伤血清处理的RAW264．7细胞释放炎症介质TNF．CI、HMGBl、IL．10的规律及意义。方法；制备严重烧伤大鼠模型获取烧伤大鼠血清；采用小鼠RAW264．7巨噬细胞，分别以烧伤大鼠血清处理制备细胞模型；细胞随机分为两组：(1)正常血清处理组(2)烧伤血清处理组。两组的剂量效应分别用含有体积分数O％、5％、10％、20％的正常血清及烧伤血清的培养基与RAW264．7细胞系共培养24h，分别收取烧伤血清刺激组及对照组细胞培养上清，3500g离心

2、后留取上清于一20℃保存备用。两组的时间效应分别以含有体积分数20％的正常血清及烧伤血清培养基分别培养RAW264．7细胞0h，4h，12h，24h，同上留取离心后的培养液上清。以上每组均设3个复孔，用双抗体夹心ELISA法测定RAW264．7培养上清中TNF．a和几．10含量，Westernblot分析RAW264．7细胞}玎旧B1的含量。结果：实验发现，正常培养的小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7细胞经不同体积分数的正常血清处理24h后TNF一0【分泌量极低，而经不同体积分数的烧伤血清分别处理24h后RAW264．7细胞能分泌大量的耵呵F-a，(0．064-0．02rig／ha)，

3、(O．14±0．03ng／m1)，(O．164-0．04ng／na)，(o．2l±o．02ng／m1)(P<0．05)；Westernblot检测发现，发现①正常RAW264．7巨噬细胞中有少量HIdGBl表达；②应用正常sD大鼠血清干预RAW264．7细胞，发现HMGBl的表达量与正常RAW264．7巨噬细胞HMGBl表达量无显著差异，无统计学意义(P>o．05)；③应用烧伤血清干预的RAW264．7巨噬细胞，其删GBl的表达量至18小时达到高峰，至24小时仍维持高水平表达。烧伤血清诱导RAW264．7的几．10分泌量与烧伤血清浓度无显著的剂量依赖性关系，经ELISA法测定，无烧伤血

4、清对照组RAW264．7细胞几．10分泌量极低，烧伤血清组在培养24h后RAW264．7分泌Ⅱ，lO量逐渐升高。结论：烧伤血清能以时间和剂量依赖方式诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7的TNF．a的分泌增加，以时间依赖方式诱导HMGBl和IL．10的分泌增加。博士学位论文中文摘要第二章热休克反应对烧伤大鼠的保护作用及对烧伤血清诱导的巨噬细胞TNF-a，IL-10及HMGBl的影响目的：探讨HSR对烧伤大鼠的保护作用及对烧伤血清诱导的TNF．Q、IL．10和HMGBl的影响。方法：制备烧伤大鼠模型，观察72h内死亡率；伤后6h取各组动物血清观测各项血清学指标，一部分大鼠于HSR(42℃

5、，15min，室温下恢复24h)后再进行烧伤，24h后摘取肝、肺组织行病理切片检查。将传代RAW264．7细胞随机分为三组：(1)正常血清处理组。(2)烧伤血清处理组。(3)热休克预处理后烧伤血清处理组：热休克(HSR)处理：将细胞置于42℃的水浴箱中热休克1h，然后在37℃恢复12h，然后加入烧伤血清处理。三组的剂量效应分别用含有体积分数O％、5％、10％、20％的正常血清及烧伤血清的培养基与小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7共培养24h，分别收取烧伤血清刺激组及对照组细胞培养上清，3500g离心后留取上清备用。三组的时间效应分别以含有体积分数20％的正常血清及烧伤血清的培养基分别培

6、养RAW264．7细胞0h，4h，12h，24h，同上留取离心后的培养液上清，以上每组均设3个复孔。用双抗体夹心ELISA法测定RAW264．7培养上清中TNF．Q和IL．10含量，Westernblot分析}Ⅱ订GBl的含量，RT-PCR检测TNF．QmRNA的表达、几．10mRNA的表达。结果：大鼠严重烧伤后72h存活率为40％，较对照组明显下降(P<0．05)；HSR组大鼠烧伤后存活率为60％，较单纯烧伤组明显上升(P<0．05)；大鼠严重烧伤后6h血清中细胞因子TNF．a水平较伤前明显升高，IL．10水平稍增高，HSR后与烧伤组比较，IL．10水平升高，TNF．Q水平下降，显示

7、HSR明显抑制大鼠严重烧伤后血清中TNF．Q水平，并上调IL．10水平。细胞在经热休克预处理后能抑制烧伤血清诱导的HMGBl释放，热休克预处理后(热休克后恢复lh)再给予烧伤血清刺激，TNF．amRNA水平表达逐渐降低，细胞经热休克预处理后上调IL．10mRNA的表达。结论：HSR抑制烧伤血清诱导的RAW264．7细胞HMGBl释放和TNF．QmRNA的表达；HSR上调烧伤血清诱导的RAW264．7细胞IL．10mRNA的表达。Ⅱ博士学位论文中