vegf和inos作为缺氧性视网膜病变干预靶点实验的研究

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1、VEGF和iNOS作为缺氧性视网膜病变干预靶点的实验研究摘要【研究背景】新生血管生成是缺氧性视网膜病变的主要病理变化之一。有很多促血管生成因子参与了这个过程。本研究拟评价血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)和诱导型一氧化氮合成酶(induciblenitricoxidesynthase，iNOS)作为缺氧性视网膜病变中新生血管生成的干预靶点的价值；分别应用VEGF单克隆抗体Bevacizumab、iNOS抑制剂氨基胍(aminoguanidine，AG)靶向抑制VEGF、iNO

2、S后，观察在信号转导网络中，其细胞信号通路的代偿性变化，评价单药应用Bevacizumab、AG或联合应用两种药物对组织内VEOF和iNOS表达和视网膜新生血管形成的影响，为临床应用(单)多靶点药物抑制视网膜缺氧性病变提供实验证据。【资料和方法】用RT-PCR、免疫组织化学(immunohistochemistrystaining，IHC)、westernblot方法检测VEGF和iNOS在氧诱导的新生血管小鼠的模型中视网膜上早期阶段的表达特征；用RT—PCR、westernblot方法检测VEGF和iNOS在低氧环境下(022％)

3、的视网膜母细胞瘤细胞中的表达特征；在氧诱导的视网膜病变的小鼠模型中用VEGF单克隆抗体Bevacizumab和iNOS抑制剂氨基胍(AG)靶向抑制VEGF、iNOS后，采用RT-PCR、IHC、视网膜荧光血管铺片及透射电镜观察视网膜上VEGF和iNOS表达的特征、视网膜新生血管形成以及组织形态结构的变化。【结果】小鼠视网膜上VEGF和iNOS的mRNA和蛋白表达水平均上调，并呈较为明显的时间依赖性特征，其中VEGF表达高峰在6h，iNOS表达高峰在2h，均以视网膜的节细胞层表达变化明显。RB细胞中VEGF和iNOS的mRNA和蛋白表

4、达水平也均上调，里较为明显的时间依赖性特征，表达特征与在动物模型中表达基本一致。在干预组中，VEGF在Bevacizumab组表达水平明显上升，而在AG组和联合用药组表达水平下降。iNOS表达水平在Bevacizumab组表达水平无明显改变，而在AG组和联合用药组表达水平下降。Bevacizumab和氨基胍(AG)可以明显抑制氧诱导的小鼠新生血管模型中新生血管的形成。三个干预组中的血管内皮细胞数与Ns组和对照组相比具有显著统计学差异(P(O．05)。在干预组中没有出现明显的组织学的结构改变。【结论】VEGF和iNOS是缺氧性视网膜病

5、变中血管生成的早期治疗靶点。AG不仅可以抑制iNOS，而且对VEGF也有部分抑制作用，且无明显的药物毒性，它抑制新生血管形成的效应至少与Bevacizumab是等效的，因此AG可以作为抑制新生血管形成的药物。关键词：缺氧，新生血管，血管内皮生长因子，诱导型一氧化氮合成酶THESTUDYOFVEGFANDiNoSASRATIONALINI’ERVENTIONALTARGETSINHYPOXIA．INDUCEDABSTRACTBACKGROUNDANDAIMS：Newbloodvesselformationisoneofthemajor

6、pathologicalchangesinthehypoxiaretinopathy．Alotofangiogenicfactorsinvolvedinthisprocess．Thisstudyistoevaluatetheroleofvascularendothelialgrowthfactor,VEGF,andinduciblenitricoxidesynthase，iNOSasrationalinterventionaltargetsinhypoxia。inducedretinopathy．Simultaneously,the

7、compensativechangesinthesignalpathwaywithinthesignaltransductionnetworkaftertheinhibitionofVEGFbyitsmonoclonalantibody,Bevacizumab，andiNOSbyitschemicalcompoundinhibitor,aminoguanidine(AG)wereevaluated．TheimpactsofBevacizumab，AGaswellastheircombinationregimenonretinalne

8、ovasculariationandtheexpressionofVEGFandiNOSweredetermined．MATERIALSANDMETHODS：RT-PCR，immunobistochemistrystaining(IH