fasl基因重组2型腺相关病毒转导大鼠骨髓来源dc和活性肾脏的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文缩略词§0NAcrAPBCIPBjsCMvDABDCDNaseEDrIAFasLFBSGFPHEHEKHRPHSV．1IHCIRESNBTODB慨缩略词表Abbreviation英文全称中文全称adeno．associatedvirus腺相关病毒acrylamide丙烯酰胺ammoniumpersulfate过硫酸铵5-bromo-4-chloro．3．indolylphosphate5-溴一4-氯-3一吲哚一磷酸bisacrylamideN，N’一亚甲双丙烯酰胺cytomegalovirus巨细胞病毒3,

2、3·．diaminobenzidine3,3’．二氨基联苯胺dendriticcell树突状细胞deoxyribonuclease脱氧核糖核酸酶ethylenediaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸fasligandFas配基fatalbovineserum胎牛血清greenfluorescentprotein绿色荧光蛋白hematoxylinandeosin苏木素伊红humanembryonickidney(cells)人胚肾(细胞)horseradishperoxidase辣根过氧化物酶herpessimp

3、lexvirustype11型单纯疱疹病毒immunohistochemistry免疫组化internalribozymeentrysite内部核糖体进入位点nitrobluetetrazolium四唑硝基蓝opticaldensity光密度Polyacrylamidegelelectrophoresis聚丙烯胺凝胶电泳，徐州医学院硕士学位论文PBSPCRPEG8000rAAVRNaseRPM盯SDSTEMEDHSV童phosphatebufferedsolutionpolyme珀sechainreactionpolyethyl

4、ene百ycol8000recombinantadeno．associatedvirusribonueleaseroundperminutereversetranscriptionSodiumDodecylSulfatetetramethylethylenediaminetfis(hydroxymethyl)aminomethaaevectorgenomes2磷酸盐缓冲液聚合酶链式反应聚乙二醇8000重组腺相关病毒核糖核酸酶每分钟转数反转录十二烷基磺酸钠四甲基乙二胺三羟甲基氨基甲烷载体基因组滴度徐州医学院硕士学位论文本论论文独创

5、性声明我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者戤拯逝论文使用授权声明日期：2QQZ生芝南本人完全了解徐州医学院有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：避导师签名：日期：型学红徐州医学院硕士学

6、位论文论文审阅认定书研究生囱l近在趣定的学习年限内，按照研究生培莽方案的要求，完成了研究生课程的学>-j，成绩合格；在我的指导下完成本学位论文，经审阅，论文中的观点、数据、表述和结构为我所认同，论文撰写格式符合学校的相关规定，同意将本论文作为学位申请论文送专家评审。导师签名日期：2QQ2彩b徐州医学院硕士学位论文FasL基因重组2型腺相关病毒转导大鼠骨髓来源DC和活体肾脏的研究中文摘要目的利用2型重组腺相关病毒载体介导FasL基因转导大鼠骨髓来源DC和活体肾脏，观察转导后FasL基因的表达，为进一步研究FasL转基因在同种异体器

7、官移植中的作用奠定基础。方法1．构建穿梭质粒pSNAV2．0-FasL-IRES-EGFP，通过脂质体转染BHK-21细胞，经G418筛选，获得载体细胞株BHK／FasL-IRE,S—EGFP；2．利用重组1型单纯疱疹病毒(HSVl．rc／AUL2)感染载体细胞，获得重组腺相关病毒；3．通过氯仿抽提、冰乙醇沉淀法纯化、浓缩重组腺相关病毒，SDS—PAGE检测其纯度，地高辛标记探针点杂交测定其滴度；4．重组腺相关病毒载体介导FasL基因转导原代培养的大鼠骨髓来源DC，RT-PCR、流式细胞仪、荧光显微镜检测其表达；5．用生理盐水或

8、重组腺相关病毒经肾动脉灌注大鼠左肾，并使之于左肾内滞留45分钟，3周、5周、7周后处死大鼠取肾脏标本，通过RT-PCR、HE染色和ICH，检测FasL表达以及评价肾脏的组织形态变化。结果1．成功构建了穿梭质粒pSNAV2．0．FasL-IRES—EGFP；2．获